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胃癌是一种全世界常见的恶性肿瘤形式,其发生发展的分子机制一直是科学研究的热点问题。其中,转录因子的异常与肿瘤的发生发展密切相关,研究其在肿瘤中的具体表达调控模式,可能为肿瘤治疗提供新的预测指标和干预靶点。分化型胚胎软骨发育基因1(differentiated embry-ochondrocyte expressed genel, DEC1)又称SHARP-2或Stra13,是由Shen等自人类软骨细胞中分离得到的一种bHLH转录因子,它广泛表达于大多数正常组织,并调节着机体正常的生理节律、自身免疫以及免疫细胞内环境的稳定。近年来研究发现DEC1在多种肿瘤存在高表达,并与肿瘤的发生发展密切相关。缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)能在缺氧的情况下诱导一系列缺氧反应基因的表达,与肿瘤生长转移及增殖凋亡密切相关。多种细胞外刺激可以引起机体DEC1表达的变化,其中研究最多的是DEC1与肿瘤组织的低氧状态的相关性。已有研究证实在多种细胞系中DEC1可被缺氧诱导表达,如肺腺癌,肾细胞癌以及膀胱癌,这些都提示DEC1和HIF-1α可能共同导致肿瘤的发生与发展。Zheng Y等研究证实DEC1在胃癌细胞株中存在高表达,但在胃癌细胞系中,缺氧状态下DEC1的表达变化及其对细胞增殖凋亡的影响尚不清楚,这是本文章研究的关键问题。目的1.检测常氧及缺氧状态下人胃癌细胞株BGC823, HGC27中DEC1的表达变化,并分析DEC1与HIF-la表达的相关性,探讨缺氧对DEC1表达调节的机制。2.建立DEC1慢病毒超表达载体,获得DEC1超表达稳定的胃癌细胞株,为研究DEC1表达调控作用提供良好的细胞模型；3.探讨DEC1对缺氧所致的胃癌细胞增殖凋亡的影响,为明确其是否可作为胃癌治疗的新靶点提供实验依据。方法1.复苏,培养胃癌细胞株BGC823和HGC27,于对数生长期传代并分组,对照组常氧培养,实验组缺氧处理。2.采用RT-PCR, Western Blot及细胞免疫荧光法分别检测各组胃癌细胞株BGC823和HGC27各组中HIF-1α和DEC1mRNA及蛋白表达情况,并进行相关性分析。3.构建超表达DEC1慢病毒载体(pGV-DEC1)和阴性对照载体(pGV)；在293T细胞中进行病毒包装和滴度测定；慢病毒载体感染胃癌细胞株HGC27,筛选获得稳定感染细胞株；Western Blotting验证慢病毒载体的有效性。4.将上述获得的稳定感染的两组细胞株分为超表达组(pGV-DEC1)和空载组(pGV),超表达组又分为常氧组(pGV-DEC1-N)和缺氧组(pGV-DEC1-H),同时空载组也分为常氧组(pGV-N)和缺氧组(pGV-H)。采用CCK-8的方法检测各组细胞的增殖情况；采用Annexin V-PE/7-AAD双染色法检测各组细胞的凋亡情况。结果1. RT-PCR, Western Blotting及细胞免疫荧光法结果显示,实验组与对照组相比,实验组HIF-1α和DEC1mRNA及蛋白表达明显高于对照组(p<0.05),且细胞免疫荧光法显示HIF-1α和DEC1的表达具有显著相关性(p<0.05)。2. Western Blotting结果显示,超表达组出现超表达条带(DEC1与GFP的融合蛋白),而空载组只有GFP条带。3.CCK-8结果显示,24h时,缺氧可以促进细胞增殖,但随着缺氧时间的延长,细胞的增殖率下降(*P<0.05)；超表达DEC1可以促进细胞增殖,且随着时间的延长细胞增殖更明显(*P<0.05)；pGV-H组与pGV-DEC1-H组相比,pGV-DEC1-H组的细胞增殖率更高,说明DEC1可以抗细胞缺氧所致的增殖抑制(*P<0.05)。4. Annexin V-PE/7-AAD双染色法结果显示,两常氧组相比,超表达组(pGV-DEC1-N)的凋亡率低于空载组(pGV-N)(p<0.05);两空载组相比,缺氧组(pGV-H)的凋亡率高于常氧组(pGV-N)(p<0.05);两缺氧组相比,超表达组(pGV-DEC1-H)的凋亡率低于空载组(pGV-H)(p<0.05)。结论1.在胃癌细胞株BGC823及HGC27中,缺氧能够诱导DEC1的表达,并且DEC1与HIF-1a的表达具有显著的相关性。2.成功构建了DEC1超表达慢病毒表达载体,感染胃癌细胞HGC27,经嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选,获得了稳定表达DEC1的胃癌细胞株。3.超表达DEC1可以促进细胞增殖,并拮抗缺氧所致的细胞凋亡。