【摘 要】
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B淋巴细胞刺激因子（BLyS）是1999年发现的肿瘤坏死因子（TNF）家族的一个新成员，主要调节B细胞的增殖、分化，BLyS表达异常会引起严重的免疫功能紊乱。本研究首先在大肠杆菌中对BLyS134
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B淋巴细胞刺激因子（BLyS）是1999年发现的肿瘤坏死因子（TNF）家族的一个新成员，主要调节B细胞的增殖、分化，BLyS表达异常会引起严重的免疫功能紊乱。本研究首先在大肠杆菌中对BLyS134-285进行了可溶表达，获得了有活性的表达产物，以BLyS134-285为靶蛋白对噬菌体随机12肽库进行亲和淘洗，筛选到一结合肽；其次将该肽与BLyS受体—B细胞成熟抗原（BCMA）胞外区序列比较，确定位点对BCMA进行了定点突变，并找到BCMA与BLyS134-285结合的关键氨基酸；同时，我们用BLyS134-285和FP248两种蛋白分别对噬菌体展示scFv文库进行淘洗，在获得各自高亲和力克隆的基础上，成功地将抗体噬菌体作为一抗在Western blot中应用，为Western blot中一抗的获得提供了一种新的途径。研究工作分为以下三个部分： （1）在大肠杆菌BL21（DE3）中以低温诱导获得了BLyS134-285的可溶性表达，经过Ni-NTA树脂纯化表达产物，纯度达到80％左右；分离小鼠脾脏B细胞，用MTT法测定BLyS134-285对其的增殖情况，证实了BLyS134-285的活性。以BLyS134-285为靶蛋白对噬茵体展示随机12肽库进行了筛选。经过3轮淘洗，噬菌体产出与投入的比值逐轮升高，表明与BLyS134-285特异性结合的噬菌体得到了富集。在洗脱时我们采用了酸洗脱与受体竞争洗脱相结合的形式，最后从第3轮高浓度受体洗脱下的噬菌体中，随机挑选20个克隆用ELISA测定结合活性，并将强阳性信号的克隆送出测序，多个克隆在测序后得到了同一个小肽序列（T1）。将T1与GST融合，在大肠杆菌获得高表达，目的蛋白表达量占菌体总蛋白50％，用Glutathione-agarose纯化后纯度高达95％。ELISA实验进一步确证了融合表达的
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