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目的探讨人类原发性胆囊癌的发生是否与幽门螺杆菌(Helicobacter pylor,Hp)的感染有关,为原发性胆囊癌的治疗提供新的思路。方法采用病例对照研究,选取18例原发性胆囊癌(primary carcinoma of the gallbladder,PCG)和40例慢性胆囊炎、胆结石(chronic cholecystitis or cholelithiasis,CC)患者的血清标本以及手术后的胆囊粘膜、胆汁标本进行Hp检测,选取20例排除PCG和CC的患者作为对照。采用ELISA方法检测各组血清中Hp IgG的存在;利用微氧培养基从新鲜胆囊粘膜和胆汁标本培养螺杆菌;DNAzol提取胆囊粘膜和胆汁中的DNA,采用巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法扩增螺杆菌特异的16S rRNA基因;对PCG组螺杆菌16S rRNA基因阳性的样品检测Hp特异26KDa蛋白基因和4个相关功能基因(cagA、vacA、rps4、ureA),并进行测序分析,确定检出的细菌是否为Hp;westerblot检测Hp相关功能蛋白UreA、UreB、VacA和CagA,初步探讨Hp感染导致PCG发生的机制。结果1、术前一天,PCG组中,18份血清标本中有16份显示为Hp IgG阳性,阳性率为88%;CC组中,40份血清标本有25份显示为Hp IgG阳性,阳性率为63%;对照组中,20份血清标本有7份显示为Hp IgG阳性,阳性率为35%;PCG组中Hp IgG阳性率明显高于CC组和对照组。术后,Hp IgG阳性率逐渐下降,术后一年,三组Hp IgG阳性率差异无统计学意义。2、PCG、CC和对照组患者新鲜胆囊粘膜或胆汁标本中均未能培养出螺杆菌。3、PCG组中,36份胆囊粘膜和胆汁标本有29份检出螺杆菌属特异性16S rRNA基因,阳性率为81%;CC组中,80份胆囊粘膜和胆汁标本有40份检出16S rRNA基因,阳性率为50%;对照组中,40份胆囊粘膜和胆汁标本有8份检出16S rRNA基因,阳性率为20%;其中PCG组16S rRNA基因检出率明显高于CC组和对照组,CC组螺杆菌基因检出率显著高于对照组。4、29份螺杆菌16SrRNA基因阳性的胆囊粘膜或胆汁标本中,15份cagA基因阳性,阳性率为52%;25份26KDa基因阳性,阳性率为86%;14份ureA基因阳性,阳性率为48%;vacA基因和rps4基因阳性率均为零。27份标本cagA、26KDa、vacA、ureA和rps4基因至少一项阳性,阳性率为93%。5、29份螺杆菌16S rRNA基因阳性的胆囊粘膜或胆汁标本经测序鉴定,与Hp有99%以上的同源性。6、PCG组中,UreA、UreB、VacA和CagA蛋白阳性率分别为39%、11%、6%和42%;CC组中,UreA、UreB、VacA和CagA蛋白阳性率分别为24%、11%、8%和29%;对照组中,UreA、UreB、VacA和CagA蛋白阳性率分别为7%、10%、5%和10%;PCG组CagA和UreA蛋白的阳性率及平均光密度值明显高于其它两组,UreB和VacA蛋白三者差异不具有统计学意义。结论PCG患者中存在Hp的高感染率,且明显高于CC组和对照组。研究结果初步提示Hp感染与PCG的发生有关,UreA蛋白和CagA蛋白可能在PCG的发生中起到了重要作用。