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植物内生菌是一个多样性十分丰富的微生物类群,作为一类新的微生物资源备受关注。植物内生菌是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部的微生物。普遍存在于目前已研究过的陆生和水生植物中,植物中的内生菌在长期的自然选择下能够产生与寄主植物相同或相似的具生物活性的次级代谢产物。目前从植物内生菌中分离纯化鉴定出很多种化合物:生物碱、萜类、酚类、醌类和黄酮等次生代谢产物,并对其在生物学活性方面进行了研究,如抗肿瘤、抗菌、抗氧化、免疫抑制作用和促进植物生长等方面。植物的内生菌资源是丰富的,分离纯化出内生菌,研究其具有生物学活性的代谢产物,检测、分离并且得到新的单一化合物,这不仅是发现和获得新的天然产物的又一有效途径,也能为开发药物提供新的来源,更能有效地保护好生态环境,具有重要的意义。
本文选取毛茛科(Ranuneulaceae)4种植物进行研究:乌头属(Aconitum)的北乌头(Aconitum kusnezoffii)、牛扁(A.barbatum var.puberulum)、两色乌头(A.alboviolaceum)和唐松草属(Thalictrum)的东亚唐松草(Thalictrum minus var.hypoleucum)。在PDA固体培养基上分离根中的内生菌,并进一步研究内生菌的代谢产物。目前从上述植物材料中分离得到内生真菌共25株,其中从乌头属植物中分离得到19株:草乌中得到内生真菌11株,编号为C1-C11,从两色乌头中分离到6株,编号为L1-L6,牛扁中分离到2株,编号为N1-N2,从唐松草属植物东亚唐松草中分离到6株内生真菌,编号为D1-D6。另外,从乌头属植物和东亚唐松草的根中还分离到内生细菌或者为内生放线菌,共16株,分别编号为X1—X16。选取适宜的条件,对所得的25株内生真菌进行少量的液体发酵,将发酵液用氯仿和正丁醇分相萃取,各5次,收集浓缩,得到内生真菌发酵液的氯仿提取物和正丁醇提取物。内生真菌液体发酵后的菌丝体用甲醇提取产物,超声破碎后过滤,3次,收集浓缩得到菌丝体的甲醇提取物。对上述得到的所有提取物进行检测,结合TLC和HPLC等方法进行综合分析,以判断样品中是否含有对照品或者是其他的化合物。并对部分的样品进行硅胶柱层析分离,以期获得单一化合物。对内生真菌LJ1菌丝体的甲醇提取物0.5g,进行了初步的分离,首先进行硅胶(200-300目)柱层析,正己烷-乙酸乙酯(10:0-0:10)梯度洗脱,得到SJ1、SJ2两个单体化合物,其化学结构正在鉴定中。