辣椒疫霉质外体效应分子SCR209的功能分析

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辣椒疫霉(Phytophthora capsici Leonian)是一种寄主范围很广的重要植物病原卵菌,经常危害茄科、葫芦科、豆科等多种农作物。在侵染过程中,疫霉菌通常分泌大量不同种类的效应分子进入植物体内,干扰植物的生理功能,抑制植物的免疫反应,以利于自身的侵染。因此,明确疫霉菌效应分子的功能,阐明疫霉菌致病的机理,对控制植物疫病具有重要意义。PcF/SCR型效应分子是一类分泌到植物细胞间的卵菌效应蛋白,但目前尚不清楚它们在侵染过程中的作用。本文以辣椒疫霉PcF/SCR型效应分子SCR209为对象,分析其功能,获得的主要结果是:(1)利用半定量RT-PCR技术分析究了 PcF/SCR型效应分子SCR209编码基因在辣椒疫霉生长发育阶段(菌丝、游动孢子囊、游动孢子和萌发的休止孢)和侵染本氏烟阶段(接种后1.5、3、6、12、24、36、72 h)的表达情况。结果发现,scr209基因在辣椒疫霉生长发育阶段和侵染本氏烟阶段上调表达。(2)通过高保真扩增技术将该基因克隆到马铃薯X病毒(Potato virusX,PVX)表达载体中,利用农杆菌介导的瞬时表达法分析该基因能否引起本氏烟和番茄的细胞死亡。结果发现,SCR209能够引起本氏烟和番茄产生细胞死亡。(3)通过高保真扩增技术将基因与红色荧光蛋白融合,利用农杆菌介导的瞬时表达法分析SCR209在侵染过程中在植物中的定位。结果发现,在侵染过程中SCR209可能泌出并定位在植物细胞膜上。(4)为进一步了解该效应分子的功能,本论文在辣椒疫霉中进行了基因沉默和CRISPR/Cas9基因敲除分析,测定基因沉默转化子和敲除转化子的致病力和其它生物学性状是否发生了变化。结果显示,scr209基因的沉默和敲除都能显著削弱辣椒疫霉对寄主植物的致病力,而且基因沉默和基因敲除都导致辣椒疫霉丧失对不同类型的外源活性氧(过氧化氢和过氧化氢异丙苯)的抗性。结果说明PcF/SCR型效应分子SCR209在辣椒疫霉侵染植物的过程中发挥重要作用,该蛋白可能是通过应对植物中的活性氧防卫而发挥致病作用。本论文分析了 PcF/SCR型效应分子SCR209在辣椒疫霉侵染植物过程中的作用,研究结果为认识辣椒疫霉与植物的胞间互作机制提供了重要的实验数据,为进一步分析该类效应分子的作用机理奠定了基础。
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