【摘 要】
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细胞周期的调控是生物学研究的重要问题之一，其与肿瘤的发生密切相关。Polo样激酶l(Plkl)是调控细胞周期M期进行的关键激酶，它通过磷酸化不同的底物蛋白参与许多重要的生物学事
【出 处】
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中国科学院研究生院 中国科学院大学
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细胞周期的调控是生物学研究的重要问题之一，其与肿瘤的发生密切相关。Polo样激酶l(Plkl)是调控细胞周期M期进行的关键激酶，它通过磷酸化不同的底物蛋白参与许多重要的生物学事件的发生，如G2-M转换，纺锤体形成，染色体分离以及胞质分裂等。我们发现了Plkl的一个新的底物蛋白--Rio2。目前认为Rio2是一类丝氨酸蛋白激酶并且在核糖体成熟过程中发挥重要功能，而Rio2是否参与调控细胞周期的进行还尚未有报道。
本文通过免疫共沉淀和GST pull-down实验证实了Plkl与Rio2在体内外存在相互作用，并且发现Plkl通过氨基端与Rio2结合；Plkl激酶活性不影响Plkl与Rio2的相互作用。体外激酶实验证实Rio2是Plkl的底物。通过质谱鉴定以及体外激酶实验确定Plkl对Rio2的磷酸化位点为S335，S380及S548。过表达Rio2会延缓细胞周期M期的完成；而利用siRNA敲低Rio2则会促进M期的进行，说明Rio2调控M期的正常进行。过表达Rio2的模拟磷酸化突变体Rio2 S3D(S335D/S380D/S548D)与Rio2野生型一样也会造成M期进行的延缓，而非磷酸化突变体Rio2 S3A(S335A/S380A/S548A)的过表达却没有这种影响，这说明了Plkl介导的Rio2磷酸化与Rio2在M期的功能是紧密相关的。通过活细胞成像实验进一步发现与Rio2 S3A相比，过表达Rio2野生型主要影响M期中后期的转换。以上结果证明了Rio2是Plkl的底物并且通过Plkl的磷酸化来调控细胞周期M期的中后期转换。
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