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诱导器官移植受者对供者抗原的免疫耐受是防治移植排斥反应的最理想方法，也是移植免疫领域的重要发展方向。现已证实未成熟树突状细胞(immaturedendritic cell，imDC)在外周免疫耐受的维持中发挥重要作用，而维持DC的稳定不成熟状态是影响免疫耐受诱导效果的一个关键性问题。本课题采用细胞因子(cytokines，CKs)定向诱导的方法培养了小鼠骨髓源DC，观察了免疫抑制剂雷帕霉素(rapamycin，RAPA)和地塞米松(dexamethasone，DEX)对体外培养的小鼠DC分化、发育和生物学功能的影响，以及imDC和免疫抑制剂联合应用对同种异基因小鼠皮肤移植物的保护作用，以期为诱导移植免疫耐受提供新方法。我们主要开展了以下研究工作：
1.小鼠骨髓源DC的培养、形态观察和表型鉴定。
收集C57BL/6小鼠骨髓细胞，经裂解红细胞和贴壁纯化后，加入含有GM-CSF、IL-4的RPMI1640完全培养液培养，动态观察细胞形态变化，收集疏松粘附细胞及悬浮细胞，用流式细胞术进行表型鉴定。在光镜和扫描电镜下观察到培养细胞出现了典型的形态学变化：培养早期细胞体积变大，光镜下可见细胞表面呈网格状，胞膜出现较短的毛刺，胞核分辨不清；扫描电镜下可见细胞表面凹凸不平，有毛刺状或裙褶状细胞突起。随着培养时间延长，细胞逐渐变小，表面突起逐渐变密、变长成为树枝状即呈现典型的成熟DC形态。流式细胞仪检测显示，培养7天的细胞表面表达DC特异性标志CD11c的比率可达70％左右。
2.雷帕霉素和地塞米松对小鼠DC分化成熟的影响。
采用免疫荧光双抗体标记法，通过流式细胞仪检测CD11c+细胞中协同刺激分子CD86和MHC-Ⅱ类分子I-Ab的表达率以判断DC的发育阶段。通过单向混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte culture，MLR)，观察DC刺激同种异基因T细胞增殖的能力。我们发现常规培养7天的DC表面CD86和I-Ab的表达率较低，经脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激后明显升高，说明此种DC大多数是imDC，而LPS可诱导其很快发育成熟。培养体系中加入RAPA或DEX后，DC表面CD86表达水平在LPS刺激后无明显变化，仍处于较低水平，显示经RAPA或DEX处理的DC具有LPS抗性。MLR显示此种DC刺激同种异基因T细胞增殖的能力与成熟DC相比明显降低。表明RAPA和DEX均可使DC处于稳定不成熟状态并具有耐受原性。
3.耐受原DC诱导小鼠皮肤移植耐受。
以C57BL/6(H-2b)小鼠做为皮肤移植的供鼠，以BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠进行皮肤移植。术前1周给受鼠注射供鼠imDC，或给予RAPA(3mg/kg/d)灌胃，或两种方法联合应用。术后观察移植皮片存活时间，并取移植皮片作组织学观察。实验结果显示：未做任何处理的对照组移植皮片平均存活时间是11.00天；RAPA组和imDC组分别为14.75天和13.50天；而联合组为18.33天。以上结果说明：移植术前联合应用RAPA与imDC比单独应用其中一种方法更为有效，提示RAPA与imDC在诱导小鼠皮肤移植耐受中具有协同作用。移植皮片的组织学检测表明，这种耐受诱导方案可以减轻移植排斥反应所造成的病理损伤。