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目的:肺癌是全世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,患者长期生存率较差。自然杀伤细胞(NK)是机体主要发挥天然抗肿瘤免疫功能的细胞之一。近些年来的研究显示miRNA可以通过调节NK细胞表面活性受体及其配体的表达来影响NK细胞的抗肿瘤作用。本研究旨在探寻miRNA-422a对NK细胞表面受体分子DNAM-1影响以及相关机制和其最终对肺癌发生发展的作用。方法:首先设定筛选条件,运用GEO数据库筛选出与非小细胞肺癌(NSCLC)密切相关的miRNA。应用miRNA靶基因预测数据库预测miRNA的潜在靶点,选出与NK细胞表面受体相关的miRNA。收集117例NSCLC(术前穿刺、术后病理证实)患者外周血PBMC,磁珠分选法分选出NK细胞,血清冻存。通过匹配,排除年龄、性别、吸烟史等的影响,成功将30名肺癌患者同肺良性肿瘤患者进行匹配。同期体外培养原代NK细胞(h NK)、NK92细胞系。运用q RT-PCR、流式细胞学、western blot检测不同培养条件下h NK、NK92活化性受体DNAM-1及miR422a的表达情况。运用细胞转染及双荧光素酶报告方法检验miR-422a对DNAM-1的表达的影响及作用位点。将NK92细胞分别与K562、A549及H520细胞共培养(靶效比20:1),培养基中分别加入外源性TGF-β1、Kyn和培养液。乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测TGF-β1、Kyn对NK细胞杀伤活性的影响。结果:1、GEO数据库筛选出六种miRNA:miR-106a、miR-200b、miR-210、miR-422a、miR-155、miR-183。应用miRNA靶基因预测数据库,发现miR-422a可与NK细胞上活化性受体DNAM-1(CD226)的基因匹配,确定目的miRNA。2、miR-422a在肿瘤组织和细胞中均高表达。miR-422a在NSCLC的表达显著高于肺部良性肿瘤。3、体内实验及体外实验均显示miRNA-422a可显著降低NK细胞表面受体DNAM-1的表达,抑制NK细胞的细胞毒作用。进一步的实验显示,TGF-β1而不是L-kynurenine(L-犬尿氨酸)可以显著升高NK细胞内miRNA-422a的表达量,后者通过抑制NK细胞表面DNAM-1的表达,抑制NK细胞对肺癌细胞的杀伤作用。相反,降低NK细胞内miRNA-422a的表达量,可显著提高NK细胞表面分子DNAM-1的表达,进而增强DNAM-1介导的NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。结论:非小细胞肺癌患者体内TGF-β1可通过促进miRNA-422a上调抑制NK细胞表面活性受体分子DNAM-1的表达。miRNA-422a有望成为调控肺癌免疫监视的重要靶点。