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草鱼(Ctenopharyngodon idellus)是我国重要的淡水养殖鱼类。在草鱼养殖中,疾病是限制其养殖生产的一个重要因子,免疫防治是控制疾病的重要而有效的途径。本文对草鱼三个免疫因子进行了克隆鉴定以及表达分析,这三个基因涉及到糖基化修饰、肿瘤免疫以及细胞凋亡三个方面。通过RACE技术获得草鱼SIMP以及两个凋亡相关基因的cDNA全长,并采用PCR和Genome Walking的方法克隆了SIMP启动子区域,对SIMP进行了基因组结构分析。草鱼免疫优势MHC相关多肽(gcSIMP) cDNA序列全长为4384 bp。其中5′、3′非编码区分别为1117 bp、849 bp,开放阅读框包含2418 bp,编码805个氨基酸。获得的gcSIMP基因组全长约为24212bp,整个基因组结构跨越16个外显子和15个内含子。启动子区域缺乏典型的TATA或CAAT结构,但存在GCN4, YY1, Sp1, Palpha, TBP, Hb,C / EBPalp,C / EBPbeta,Oct-1和AP-1等潜在的转录因子结合位点。草鱼肿瘤坏死因子受体相关因子1(gcTRAF1)基因的cDNA序列全长为2235 bp。其中5′、3′非编码区分别为250 bp、326 bp,开放阅读框包含1659 bp,编码552个氨基酸。草鱼肿瘤坏死因子受体相关因子2(gcTRAF2)全长为3162 bp。其中5′、3′非编码区分别为60 bp、1491 bp,开放阅读框包含1611 bp,编码536个氨基酸。对三个基因转录和表达产物的器官组织分布进行了详细的分析。Real time PCR表明这三个基因在草鱼组织中呈组成型表达,且三者具有不同的组织分布模式。分别构建gcSIMP、gcTRAF1和gcTRAF2基因的原核表达质粒,通过原核表达、表达蛋白纯化、并制备多克隆抗体,对脑、鳃、心脏、头肾、中肾、肝脏、肌肉、脾脏、和胸腺等器官中的目的基因蛋白进行免疫印迹分析。Western blotting结果显示gcTRAF1和gcTRAF2蛋白在各个组织中广泛表达。两种分析方法均显示了在心脏中目的基因gcTRAF1和gcTRAF2的表达量最高,在中肾中的表达量最低。