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肌醇-1-磷酸合成酶(myo-inositol-1-phosphatesynthase，MIPS)是肌醇生物合成的关键酶，肌醇可以作为一种渗透保护物质，保护植物免受逆境伤害。9一顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(9-cis-epoxycarotenoiddioxygenase，NCED)是高等植物ABA合成途径的关键酶，ABA在植物抗逆性调控中起重要作用。阿拉伯糖醛酸内酯氧化酶（arabinono-1，4-1actoneOxidase，ALO）是酵母中赤藓抗坏血酸(erythroascorbicacid，EASC)生物合成途径的关键酶，能催化半乳糖醛酸内酯和古洛糖醛酸内酯反应生成抗坏血酸;而抗坏血酸是重要抗氧化剂，在植物抵抗氧化伤害中起重要作用。本实验室已从黄花苜蓿克隆了MfMIPS，从柱花草克隆了SgNCED，从酵母克隆了ALO，并将它们过量表达在烟草，提高了转基因烟草的抗逆性。MfCOR1是从黄花苜蓿克隆的一个响应低温诱导的未知功能新基因，在烟草过量表达后促进植株生长，提高抗寒性。为更有效的发挥抗逆基因在改良植物抗逆性中的作用，本实验又进一步构建了以bar基因为选择标记的4个双基因表达载体:pCAMBIA-MIPS-NCED、pCAMBIA-MIPS-ALO、pCAMBIA-MIPS-CORl、pCAMBIA-NCED-ALO，以及单基因表达载体pCAMBIA-NCED。本文的目的利用这4个双基因表达载体，转化模式植物烟草，获得过量表达的转基因烟草，为比较分析表达双基因与表达单基因植物的抗逆性奠定基础。同时，本文还摸索了农杆菌介导的南方大豆的遗传转化，为上述抗逆基因改良大豆抗逆性奠定基础。 将上述的4个双基因表达载体分别电击转化农杆菌EHA105，用农杆菌介导的叶盘法转化烟草品种中烟90，经过Basta筛选，获得了Basta抗性再生植株。对移栽存活的Basta抗性烟草进行了分子检测，鉴定出转MIPS-NCED基因烟草阳性植株27株，转MIPS-ALO基因烟草阳性植株37株，转MIPS-COR1基因烟草阳性植株29株，转NCED-ALO基因烟草阳性植株31株。选取所有PCR阳性的转基因To代烟草，用改进过的CTAB法大量提取DNA，将烟草基因组DNA用EcoRⅠ完全酶切，电泳分离后转移到尼龙膜，进一步进行了Southern杂交分析。但由于的实验系统问题，本文的Souhern杂交检测结果不理想。 将表达载体pCAMBIA-NCED电击转化农杆菌EHA105，试图通过农杆菌介导的方法大量转化大豆品种华夏1号和华夏3号，以获得抗逆大豆新材料。本文经过外植体的准备和浸染、共培养、丛生芽的诱导、丛生芽的伸长、生根诱导等步骤，获得了1株华夏1号可生根植株，3株华夏3号可生根植株，其中华夏3号有1株移栽至土壤中，但由于根系不够强壮，移栽至土壤四周左右就烂根死亡了，故至今还尚未得到转基因植株。