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[目的]： 1.利用慢病毒介导的RNA干扰技术构建人类淋巴母细胞（简称TK6细胞）的PARP-1基因沉默稳定细胞株（简称TK6-shPARP1细胞），作为后续研究的工具细胞; 2.阐明PARP-1/P53信号通路在氢醌(Hydroquinone，HQ)诱导人淋巴母细胞凋亡中的作用及其可能机制。 [方法]： 1.应用RNA干扰技术构建PARP-1基因沉默细胞株:利用瞬时转染方法筛选出具有最佳干扰效果的shRNA片段，将该片段与慢病毒载体pLVX-shRNA1连接形成重组质粒，经DNA测序鉴定后进行病毒包装，随后转导至TK6细胞中，再经嘌呤霉素筛选而得到稳定表达PARP-1 siRNA的PARP-1基因沉默细胞株，最后用qPCR和Western blotting鉴定所构建的细胞株。 2.细胞凋亡检测:利用Hoechst33342染色试剂定性观察细胞凋亡情况;再用Caspase-3酶活性检测试剂盒定量检测Caspase-3酶活性的改变情况。 3.应用Western blotting技术检测P53信号通路相关蛋白: 在不同浓度HQ作用于人淋巴母细胞TK6细胞后PARP-1、SIRT-1、P53、Caspase-3、Bcl-2、Fas、K-ras蛋白的表达情况;在不同浓度HQ作用于TK6-shPARP1细胞后SIRT-1、P53、Caspase-3、Bcl-2、Fas、K-ras蛋白的表达情况。 [结果]： 1.成功构建PARP-1基因沉默细胞株:转染shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4细胞的PARP-1相对表达量分别为0.289、0.538、0.375和0.474，故选择shRNA1作为干扰PARP-1基因最佳片段。用0.5μg/ml的嘌呤霉素成功筛选出PARP-1沉默细胞株和空载体对照细胞株，并从mRNA水平、蛋白质水平、细胞表型水平三个层次来检测PARP-1基因的干扰效率，抑制效率超过80％。 2.HQ染毒对细胞凋亡影响:Hoechst33342染色显示在TK6正常细胞中，随着HQ浓度的增加，凋亡小体的数量明显增加，而在TK6-shPARP1细胞中凋亡小体的数量呈现先增后减的趋势;Caspase-3酶活性检测显示在TK6正常细胞中，随着HQ浓度的增加，Caspase-3酶活性逐渐升高，而在TK6-shPARP1细胞中Caspase-3酶活性呈现先增后减的趋势。 3.蛋白表达水平的改变情况: TK6正常细胞中，随着HQ浓度的增加，PARP-1、P53、Caspase-3、Bcl-2、Fas、K-ras蛋白表达水平逐渐升高，SIRT-1蛋白表达水平逐渐降低;TK6-shPARP1细胞中，随着HQ浓度的增加，SIRT-1、Caspase-3、Bcl-2、Fas蛋白表达水平呈现先增后减的趋势，P53、K-ras蛋白表达水平逐渐升高。 [结论]： 1.成功构建PARP-1的siRNA慢病毒干扰载体，并筛选出PARP-1基因沉默的TK6细胞株，携带shRNA的慢病毒稳定、高效干扰PARP-1基因表达。 2.特异性沉默PARP-1基因，增加了HQ诱导细胞凋亡的敏感性，PARP-1对HQ诱导细胞凋亡具有重要作用。 3.在P53信号通路参与的HQ诱导TK6细胞凋亡过程中，PARP-1通过激活P53信号通路相关蛋白，进而调节P53介导的细胞凋亡。