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研究背景与目的:2型糖尿病是全球高发的代谢性疾病,常伴有脂肪肝的形成,由此导致的肝损伤已成为2型糖尿病患者死亡的主要原因之一。随着近年来2型糖尿病确诊人数和手术量的上升,2型糖尿病高脂肝损伤患者所占手术患者比例也逐渐增加,该类肝损伤患者在围术期受到手术创伤应激反应与多重麻醉药物治疗影响时,可能进一步加重其肝损伤程度。因此,针对2型糖尿病高脂肝损伤发病机制,从麻醉用药角度出发,寻找既不进一步加重其肝损伤程度且能起到一定肝保护作用的麻醉药物,探索其肝保护作用机制具有很重要的临床意义。右美托咪定是一种新型的镇痛镇静性麻醉药物,近年来研究发现右美托咪定除了镇痛镇静作用外,还具有抗炎、抗氧化、调节免疫功能等作用,但是围术期使用右美托咪定是否对2型糖尿病高脂肝损伤患者的肝细胞具有保护效应,目前尚无明确的研究。因此本研究通过探讨右美托咪定对高脂肝细胞损伤的保护作用,并初步阐明其主要作用机制,以期为2型糖尿病高脂肝损伤患者围术期肝细胞保护的麻醉用药提供理论基础。材料与方法:本研究首先用苏木精-伊红染色(HE)、油红O染色和活性氧DHE染色的方法对正常小鼠和糖尿病小鼠(db/db小鼠)肝脏组织的空泡样变、脂滴沉积和活性氧释放情况进行对比观察,根据db/db小鼠肝脏组织的病理损伤机制进行细胞干预实验。细胞干预实验采用人肝癌细胞(HepG2)作为研究对象,设置对照组、高脂肝细胞损伤模型组和右美托咪定治疗组。利用MTT法检测细胞活力,明确棕榈酸对HepG2细胞的最适损伤浓度以制备高脂肝细胞损伤模型,考察右美托咪定对高脂损伤条件下肝细胞的保护效应,并确定右美托咪定的最佳作用剂量;通过酶联免疫吸附测定法检测各组肝细胞功能和肝细胞脂质代谢情况;通过油红O染色法观察各组肝细胞脂滴沉积情况;用活性氧染料DHE染色检测各组肝细胞内活性氧生成水平的变化;采用蛋白免疫印迹实验检测各组肝细胞中抗氧化应激元件核因子E2相关因子2(Nuclear Factor-E2-related Factor 2,Nrf2)及其下游抗氧化基因醌氧化还原酶-1(NADPH Quinone Oxidoreductase-1,NQO-1)、超氧化物歧化酶2(Superoxide Dismutase 2,SOD2)的表达水平。结果:1.小鼠肝脏组织学评价:与正常小鼠相比,db/db小鼠肝脏组织空泡变性显著增加,其组织内脂质沉积及活性氧释放明显增多。2.棕榈酸诱导肝细胞损伤的最适作用浓度:与对照组相比,棕榈酸浓度为0.2、0.4、0.6、0.8、1.6mmol/L时肝细胞活力均明显降低,但其浓度达0.4mmol/L后细胞活力不再随着棕榈酸浓度的增高而继续降低,因此判定0.4mmol/L为棕榈酸的最适肝细胞损伤浓度并建立高脂肝细胞损伤模型。3.右美托咪定最佳作用剂量:与高脂肝细胞损伤模型组相比,右美托咪定浓度为1、5、10μmol/L时,肝细胞活力均有显著提升并在5μmol/L时达到肝细胞活力上升的峰值,但在右美托咪定浓度为15和20μmol/L时肝细胞活力明显低于高脂肝细胞损伤模型组,据此选择出右美托咪定的最佳作用剂量为5μmol/L,以此浓度处理高脂肝细胞设置为右美托咪定治疗组。4.右美托咪定有效改善高脂损伤条件下肝细胞的功能:与高脂肝细胞损伤模型组相比,右美托咪定治疗组肝细胞中谷草转氨酶、谷丙转氨酶水平显著降低。5.右美托咪定有效改善高脂损伤条件下肝细胞的脂质代谢能力:与高脂肝细胞损伤模型组相比,右美托咪定治疗组肝细胞内脂滴沉积显著减少,肝细胞内低密度脂蛋白、总胆固醇、甘油三酯、游离脂肪酸含量明显降低,高密度脂蛋白含量明显提高。6.右美托咪定有效降低高脂损伤条件下肝细胞的氧化应激损伤:与高脂肝细胞损伤模型组相比,右美托咪定治疗组肝细胞中活性氧释放显著减少。7.右美托咪定通过激活Nrf2信号通路改善高脂损伤条件下肝细胞氧化应激损伤:与高脂肝细胞损伤模型组相比,右美托咪定治疗组肝细胞中Nrf2的表达量明显升高,Nrf2下游抗氧化基因NQO-1和SOD2的表达量也相应增加。结论:1.右美托咪定提升了高脂损伤条件下肝细胞的活力,降低了肝细胞功能的损伤程度。2.右美托咪定减少了高脂损伤条件下肝细胞内脂滴沉积,改善了其脂质代谢异常状态。3.右美托咪定减少了高脂损伤条件下肝细胞中活性氧的释放,降低了氧化应激损伤。4.右美托咪定对高脂肝细胞损伤的保护作用机制是通过激活Nrf2信号通路增强其抗氧化能力。