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目的: 肝癌的发生发展是多基因参与、多步骤协同的复杂过程。现有研究表明，男性是肝癌发生的独立风险因素，但其具体机制尚不清楚。本研究旨在对Hras12V转基因小鼠性别差异性肝肿瘤发生的蛋白质组学进行分析，探究肝肿瘤发生发展性别依赖的分子机制。 方法: 通过对Hras12V原癌基因在肝细胞中的特异性表达诱导形成的转基因肝癌小鼠模型进行研究，探索性别差异性肝肿瘤发生发展的蛋白质组学的特点。 1.对H-ras12V转基因肝癌小鼠及正常C57BL/6J（10月龄雄性、10月龄雌性、15月龄雌性，各组9只，共计54只）小鼠进行剖检，观察和统计肝脏的病变情况;应用HE染色，检测小鼠肝组织病理变化情况。 2.对上述病理证实的正常小鼠肝组织及Hras12V小鼠肝肿瘤组织及肿瘤周围组织（10月龄雄鼠和15月龄雌鼠）进行蛋白质的提取。用Western blot方法检测磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-MEK)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（p-ERK1/2）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的蛋白水平。 3.对上述病理证实的正常小鼠肝组织及Hras12V小鼠肿瘤组织及肿瘤周围组织(10月龄雄鼠和15月龄雌鼠，各组3只，共计12只)进行蛋白质提取。用2D-DIGE方法检测正常组织、肿瘤周围组织和肿瘤组织中蛋白质变化情况。 4.在上述检测的差异蛋白点中，随机选择180个差异蛋白点，应用MALDI-TOF/TOFMS进行蛋白质鉴定。 5.在上述鉴定差异蛋白中，随机选择7个蛋白(HSP90B1、β-actin、Albumin、APOA1、CALR、FABP5和PRDX6)，应用Western blot方法进行验证。 6.使用DAVID和UniProt工具对差异蛋白进行GO和KEGG分析。 结果: 1.病理检测结果表明:Hras12V诱导的肝癌小鼠模型，在10月龄雄性和15月龄雌性小鼠中出现了多发性肝肿瘤，而在10月龄Hras12V雌性转基因小鼠和正常C57BL/6J雌雄小鼠肝组织中均未发生肿瘤。肿瘤个数统计结果表明，10月龄Hras12V雄性小鼠＜5mm，5-10mm，＞10mm肝肿瘤都显著多于15月龄Hras12V雌性小鼠，而10月龄雌性小鼠仅有少量＜5mm的小结节发生。 2.Western检测结果表明，雌雄小鼠肝肿瘤组织中的p-MEK激活程度无显著差异，而p-ERK、p-AKT和p-mTOR激活程度在雌鼠肝肿瘤组织中的激活程度都显著高于雄鼠，而p-PI3K的激活程度是雄鼠显著高于雌鼠。 3.2D-DIGE检测结果表明，在所有检测2D-DIGE胶中发现2381个差异蛋白点。肿瘤组织和肿瘤周围组织与正常组织相比，雄鼠的差异蛋白点个数显著高于雌鼠。肿瘤周围组织与正常组织相比，雌鼠的差异蛋白点个数显著高于雄鼠。 4.MALDI-TOF/TOF MS鉴定180个蛋白点，共鉴定到89个差异蛋白，且差异蛋白个数的变化趋势与2D-DIGE差异蛋白点个数的变化趋势一致。 5.Western blot检测结果表明，在雄性小鼠中，7个差异蛋白与2D-DIGE检测趋势一致;在雌性小鼠中，6个差异蛋白与2D-DIGE检测趋势一致，仅有PRDX6不一致。 6.生物信息学分析结果表明，雌鼠差异蛋白多集中在HCC相关蛋白模式中;雄鼠差异蛋白多集中在RAS相关蛋白模式中。 结论: 1.Hras12V诱导的肝癌小鼠模型，肝肿瘤的发生具有显著的雄性倾向性。 2.Ras原癌基因诱导的肿瘤发生发展过程中的分子机制和差异蛋白的变化均具有显著的雄性倾向性。