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目的:高血压可导致血管内皮功能损伤,内皮祖细胞(EPC)在血管内皮修复中发挥重要作用。本研究探讨AT受体在机械牵张致EPC功能变化中的作用,阐明高血压时EPC功能变化,及参与血管内皮损伤及修复的可能机制。
方法:分离人脐血单个核细胞,在血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)存在条件下培养7～8d得到EPC。第一部分实验将EPC随机分对照组、AngⅡ组(10-6mol·L-1)、AngⅡ+替米沙坦预处理组。半定量RT-PCR检测EPC内血管紧张素原(AGT)mRNA表达情况;血管紧张素受体AT1、AT2以及HIF1a、VEGF mRNA表达水平。第二部分实验将EPC随机分为对照组、机械牵张组、机械牵张+替米沙坦预处理组、机械牵张+ACEI预处理组。MTT法检测EPC增殖功能;Transwell迁移小室测定EPC迁移功能。半定量RT-PCR检测机械牵张对EPCs AT1、HIF1a、VEGF mRNA表达水平的影响。Western Blot观察机械牵张对ERK活性的影响。
结果:1)人脐/tEEPC表达血管紧张素Ⅱ受体(Atl受体、AT2受体),不表达血管紧张素原(AGT)。
2)外源性AngⅡ作用后,EPC的AT1受体、AT2受体mRNA表达量较对照组显著增加(p＜0.05);替米沙坦干预后AT受体表达量明显降低。
3)外源性AngⅡ作用后,EPC的HIFla、VEGF mRNA表达量较对照组显著降低(p＜0.05)。用替米沙坦预处理细胞后再用AngⅡ刺激,与单纯AngⅡ刺激组比较,HIF1a、VEGF mRNA表达明显增加。
4)机械牵张组EPC的增殖能力较对照组显著减弱(p＜0.05)。
5)替米沙坦预处理组EPC的迁移能力较机械牵张组显著增强(p＜0.05)。
6)机械牵张可降低EPC AT1 mRNA表达水平,替米沙坦预处理的细胞AT1mRNA表达水平与对照组相比无显著差异。
7)机械牵张组EPC HIF1a、VEGF mRNA表达水平较对照组显著降低(p＜0.05);用替米沙坦预处理细胞后再机械牵张刺激,与单纯机械牵张组比较,HIF1a、VEGF mRNA表达明显增加。
8)机械牵张组EPC磷酸化ERK水平较对照组显著升高(p＜0.05);用替米沙坦预处理细胞与单纯机械牵张组比较,磷酸化ERK表达明显降低。
结论:人脐血EPC表达AT1受体,不表达血管紧张素原基因,机械牵张可不依赖AngⅡ而激活AT1受体,升高ERK的磷酸化水平引起EPC功能障碍。