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第一部分:大鼠角膜移植动物模型的建立
目的:建立同种异体大鼠穿透性角膜移植模型,总结模型制作中并发症的出现原因和相应对策,提高大鼠角膜移植模型的成功率,为角膜移植排斥反应的研究打下基础。
方法:采用远交系Wistar雌性大鼠和SD雌性大鼠建立穿透性角膜移植模型。植片直径3.5mm,植孔直径3.0mm,植片采用间断缝合,缝合八针。
结果:在保留缝线、不加干预的情况下,大鼠角膜移植后16天,角膜植片排斥反应发生率在100%,平均存活时间8.9±2.3d。
结论:大鼠角膜移植模型较小鼠容易制作,其手术步骤和临床经过与人类角膜移植相似,排斥反应发生早且排斥率高;缝合八针并发症发生率较低,适用于模拟人类角膜移植进行深入的相关基础和临床研究。熟练的显微操作技术,良好的手术器械,以及充分散大的瞳孔可以最大程度地减少术后并发症的发生。
第二部分:包载Cl22MDP脂质体的制备及其包封率的测定
目的:用胆固醇和卵磷脂包裹Cl2MDP制备Cl2MDP-LIP并测定二氯亚甲基二磷酸的包封率。
方法:采用薄膜分散法制备二氯亚甲基二磷酸脂质体,利用毛细管电泳-间接紫外方法测定脂质体的包封率。
结果:所得制剂均匀,分散良好,在0.5-10mg/ml范围内,Cl2MDP-LIP对照品的峰面积(A)与其浓度(C)线性为A=12893C+7440,呈现良好的线性关系(R2=0.9992)。
结论:二氯亚甲基二磷酸脂质体制备方法和检测方法均简单,准确;包封率达到市售标准。
第三部分:二氯亚甲基二磷酸对大鼠同种异体角膜移植排斥反应的影响
目的:探讨结膜下注射二氯亚甲基二磷酸质脂体消减巨噬细胞对大鼠同种异体角膜移植排斥反应的影响。
方法:在大鼠行同种异体角膜移植后分为两组,治疗组立即在近角膜缘结膜下注射二氯亚甲基二磷酸质脂体100ul,对照组结膜下注射相同剂量PBS,并与术后2、4、6、8天重复。观察角膜排斥反应的情况,并用免疫组化、流式细胞仪检测大鼠角膜内巨噬细胞数量;用ELISA法检测植片内IL-1β的含量。
结果:植片存活时间对照组为8.9±2.3d,治疗组为26.5±3.4d,与对照组相比,治疗组植片存活时间明显延长(p<0.01),且植片的新生血管指数、水肿指数、浑浊指数及RI值4项指标均明显优于对照组,具有显著性差异(p<0.01)。在治疗组植片中免疫组化、流式细胞仪未检测到CD68阳性表达的巨噬细胞,ELISA法未检测到IL-1β,而对照组角膜植片可以检测到CD68阳性表达的巨噬细胞及IL-1β。
结论:结膜下注射二氯亚甲基二磷酸脂质体可以有效的消减角膜缘巨噬细胞,减少角膜移植片的新生血管,明显延长大鼠同种异体角膜移植植片的存活时间。