【摘 要】
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本实验研究通过自主设计并构建含人NGF分泌肽-bFGF基因的慢病毒载体质粒并成功包装出具有较高感染效率的慢病毒颗粒,对体外培养并经过鉴定的大鼠羊膜上皮细胞进行感染并筛选
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本实验研究通过自主设计并构建含人NGF分泌肽-bFGF基因的慢病毒载体质粒并成功包装出具有较高感染效率的慢病毒颗粒,对体外培养并经过鉴定的大鼠羊膜上皮细胞进行感染并筛选出稳定表达细胞,应用RT-PCR、免疫细胞化学、酶联免疫吸附等方法对基因转染效果进行检测,体外培养观察细胞生长活性,用bFGF基因转染羊膜上皮细胞的上清液对PC12细胞株进行培养,以检测所分泌bFGF的生物学活性。继而,将bFGF转染羊膜上皮细胞与未转染羊膜上皮细胞分别移植入大鼠受损视神经中,应用Hoechst33342荧光追踪移植细胞、BDA荧光标记和尼氏染色视网膜节细胞、HE染色视神经、免疫组织化学染色视神经GAP-43等方法,初步从形态学的角度研究bFGF转染羊膜上皮细胞在视神经中的存活、迁移,视网膜节细胞和视神经胶质细胞的存活和视神经轴突的再生,旨在建立可用于细胞移植治疗视神经损伤的bFGF基因转染羊膜上皮细胞,并初步探讨该细胞对改善视神经微环境和促进视神经再生的可能性。结果表明,用慢病毒作为载体能成功将bFGF基因转染入大鼠羊膜上皮细胞中,所建立的基因修饰羊膜上皮细胞能分泌bFGF多肽,具有较强的生长活性和神经营养活性;bFGF转染羊膜上皮细胞移植入受损视神经后,能在损伤部位大量存活并向损伤区两端广泛迁移,能提高视网膜节细胞存活率,增加远侧段视神经的细胞数量,促进受损视神经的少量轴突再生通过损伤部位并深入到损伤远侧段神经中约0.3 mm。未转染细胞也具有类似的作用,但作用稍弱些。提示我们建立的转染细胞能在一定程度上有效改善视神经再生微环境并促进轴突再生,为修复视神经损伤提供了一个新的有效手段。
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