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目的: 本实验利用本课题组先前构建好的MMP-2介导的肿瘤靶向性rhTNF-α融合蛋白表达质粒，对表达条件和分离纯化条件进行优化，大量提取、纯化目的蛋白。建立肺癌移植瘤裸小鼠模型进行治疗实验，从动物整体水平研究金属基质蛋白酶介导的肿瘤靶向性rhTNF-α融合蛋白的肿瘤治疗效果、靶向性及其毒副作用，为今后新药开发研制提供实验依据。 方法: 将重组表达质粒pET-42a(+)-foldon-MMP2-hTNF-α分别转入大肠杆菌Rosseta2(DE3)中，筛选阳性菌落行电泳鉴定及DNA序列分析鉴定后，通过对诱导温度、诱导剂IPTG的浓度以及表达时间等表达条件的优化，确定融合蛋白的可溶性表达的最优条件。大量提取蛋白，柱上酶切，经透析超滤浓缩获得不带GST标签的目的蛋白。急性毒性实验得到半数致死量(LD50);建立肺腺癌A549移植瘤模型，各组用药后处死裸鼠，测得肿瘤体积以及瘤重，HE染色观察瘤组织病理改变，各脏器HE染色及生化指标检测蛋白处理后肝、肾、心的损害，TUNEL检测细胞凋亡程度并行免疫组化检测各不同剂量组血管生成情况，综合评估改造后融合蛋白的靶向性、有效性以及毒副作用。 结果: 1.进一步优化融合蛋白的纯化方案，确立了重组质粒pET-42a(+)-foldon-MMP2-hTNF-α在大肠杆菌Rosetta2(DE3)的最优表达条件，实现了rhTNF-α的高效可溶形式的表达; 2.确立了融合蛋白最佳酶切反应时间以及酶浓度比例，成功切除了融合蛋白上的载体标签，获得了以三聚体形式（活性形式）存在的融合蛋白的纯化产物; 3.成功构建肺癌移植瘤裸小鼠模型，经不同处理后显示标准品rhTNF-a组及高剂量组瘤体积增长明显减慢。瘤组织内出现细胞凋亡及病理性改变，以标准品组和高剂量组更明显。药物处理后肿瘤组织内血管生成受到明显抑制，各生化指标显示高剂量组较标准品组对肝、肾、心的损害明显减轻。 结论: 实验对MMP-2介导的肿瘤靶向性rhTNF-α融合蛋白在大肠杆菌系统表达条件做了进一步的优化，实现了高效、可溶性表达;对表达产物酶切条件经优化后可获得纯化浓缩的目的蛋白产物;肺癌移植瘤裸小鼠模型治疗实验表明，融合蛋白具有很高的肿瘤杀伤效果和肿瘤靶向性。