超广谱β-内酰胺酶基因和外排泵基因差异表达对肺炎克雷伯菌耐药的影响

• 作 者: 郭丽双
• 机 构: 哈尔滨医科大学
• 出 处: 哈尔滨医科大学
• 发表日期: 2009年期
• 关键词: 肺炎克雷伯菌 超广谱β内酰胺酶 差异表达 革兰阴性杆菌 耐药菌株 耐药机制 基因表达

肺炎克雷伯菌是条件致病性革兰阴性杆菌，其耐药菌株是临床感染中常见的病原体，其耐药机制主要包括产生抗生素灭活酶、改变药物的作用靶位、改变细胞壁的屏障功能或主动外排等。　　
目的:分析哈尔滨地区临床分离的肺炎克雷伯多重耐药表型及产超广谱β-内酰胺酶基因、外排泵基因acrAB的差异表达，及其对肺炎克雷伯菌耐药的影响，以探讨肺炎克雷伯菌的耐药机制与特点。　　
方法:从哈尔滨地区连续收集非重复的肺炎克雷伯菌231株，经药敏实验初筛和灭活酶表型确认试验确定产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)菌株及检出率。PCR方法检测分离菌株的ESBL基因分布，RT-PCR检测ESBL基因的mRNA表达情况，分析菌株中ESBL基因分布和mRNA表达及其耐药情况；并用RT-PCR检测两种中药(双黄连、小檗碱)对ESBL基因表达的影响，以及中药处理前后菌株对三代、四代头孢菌素的耐药性情况；同时用PCR方法检测肺炎克雷伯菌外排泵基因acrAB存在情况，RT-PCR检测其表达，分析此基因表达对肺炎克雷伯菌耐药表型的影响。　　
结果:临床分离肺炎克雷伯菌中，产ESBL肺炎克雷伯菌检出率为52.4%(121/231)，其中TEM、SHV、CTX-M-1和CTX-M-9基因分别占49.6%、38.0%、和26.4%、29.8%；产ESBL菌株对一代、二代和三代头孢菌素的耐药率均在65%以上，与非产ESBL菌株相比，耐药率明显增加。肺炎克雷伯菌临床株ESBL基因mRNA有差异表达现象，高水平表达菌株对氨苄西林抑菌直径平均值为7.77±2.18mm，低水平表达菌株对氨苄西林抑菌直径平均值为17.29±4.17mm。中药双黄连和小檗碱均可抑制ESBL基因mRNA的表达，小檗碱的抑制作用强于双黄连，两种中药处理均可降低肺炎克雷伯菌对头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟等头孢菌素类抗生素的耐药性，但对菌株携带ESBL基因情况无明显影响。231株肺炎克雷伯菌临床株中，共检测出外排泵基因acrAB阳性的肺炎克雷伯菌73株，检出率为31.6%；肺炎克雷伯菌临床株中外排泵基因acrAB的mRNA存在差异表达现象，高水平表达菌株对环丙沙星(CIP)的MIC50为32μg/mL，低水平表达菌株对CIP的MIC50为2μg/mL；在氰氯苯腙(CCCP)存在情况下，高水平表达菌株对CIP的MIC50为8μg/mL，而低水平表达菌株对CIP的MIC50为1μg/mL；但是小檗碱作用前后菌株对抗生素的耐药性(MIC)无明显变化。　　
结论:哈尔滨地区分离的肺炎克雷伯菌临床株有较高的耐药频率，其耐药机制主要有ESBL和外排泵的产生等。同时发现肺炎克雷伯菌临床菌株中ESBL基因和外排泵基因存在mRNA差异表达，可影响菌株对抗生素的耐药性；并且使用中药双黄连和小檗碱可以在一定程度上抑制ESBL基因的表达，而降低相应菌株的耐药性，但对外排泵功能无影响。