【摘 要】
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灰树花是一种重要的真菌研究资源,无论是子实体,发酵液,还是菌丝体均能分离纯化出多种生物活性物质。从发酵液中分离纯化得到的灰树花胞外多糖(GFP)已初步被证实具有降血糖的
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灰树花是一种重要的真菌研究资源,无论是子实体,发酵液,还是菌丝体均能分离纯化出多种生物活性物质。从发酵液中分离纯化得到的灰树花胞外多糖(GFP)已初步被证实具有降血糖的功能,然而通过建立细胞模型研究灰树花胞外多糖的降血糖活性并对其作用机理进行探讨还未见相关报道。本实验利用液体深层发酵培养,通过醇提的方法得到灰树花胞外多糖,经过葡聚糖凝胶色谱(Sephadex G-200)、超滤等方法对活性组分进行分离纯化,同时利用活性跟踪检测各组分体外抑制α-葡萄糖苷酶活性,筛选得到活性较高的组分(GFP-2)；并通过葡聚糖凝胶色谱法(G-75)和高效液相层析色谱分析鉴定GFP-2是分子量约为45300Da,纯度较高的宏观均一组分；对其理化性质分析,GFP-2是一种含有β型糖苷键和吡喃糖环的非淀粉类,不含蛋白和核酸的中性多糖；通过体外高浓度胰岛素共同孵育人肝癌细胞(HepG2)建立胰岛素抵抗细胞模型,以GFP-2为研究对象,研究其降血糖活性,并对其改善胰岛素抵抗的作用机理进行探讨,证实GFP-2具有较强的提高糖代谢效率和缓解胰岛素抵抗的活性。通过免疫印迹检测可知,GFP-2与细胞膜接触活化胰岛素受体蛋白(IRS)并促进磷脂酰肌醇3激酶(Pi3k)的110-β亚基的活化并转移至下游信号蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)并使之473位丝氨酸磷酸化,p-AktSet473抑制糖原合成酶激酶-3(GSK-3)并促进糖原代谢的活化；与此同时检测糖异生关键酶(葡萄糖6磷酸酶,G-6-p),糖酵解关键酶(丙酮酸激酶)和胞内糖原含量变化。结果表明GFP-2具有提高葡萄糖吸收并转化为糖原的代谢过程,而达到改善胰岛素抵抗功效,最终达到降低血糖的功能,为其开发辅助降血糖功能食品或药物提供了理论依据和技术支撑。
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