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目的:观察桂枝附子温阳通络配伍对OPG/RANKL/RANK信号通路的影响,探讨其治疗RA的骨保护作用机制,从而论证所提出的“假说”,即桂枝附子温阳通络配伍环境,通过调节OPG/RANKL/RANK信号通路抗RA骨侵蚀从而起到骨保护的作用。以期探寻中医药防治RA的骨保护作用机制,从而提高中医药防治R A的临床疗效。方法:实验通过II型胶原制备CIA大鼠模型,灌胃后取含药血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中OPG、RANK和RANKL的表达。将50只Wistar大鼠随机分出10只为正常组,剩40只采用牛Ⅱ型胶原造CIA大鼠模型。依照Wistar大鼠胶原关节炎的诱导参考文献将100mg牛Ⅱ型胶原蛋白溶于10mL 0.1M的醋酸中,置于4℃过夜,再与等量的完全弗氏佐剂混合,制备Ⅱ型胶原终浓度为5mg/mL的混合物。然后用注射器反复抽吸,直至混合物完全、充分乳化,以乳化物滴入水中不松散为度。取乳化后的混合物,于大鼠尾根部皮内注射0.1mL背部皮内各注射0.1mL,每只共给Ⅱ型胶原1mg,并压迫注射部位30s,以使乳化物吸收完全。正常对照组给予同等剂量的生理盐水,于大鼠尾根部皮内注射0.1mL背部皮内各注射0.1mL。第14天加强免疫一次。造模成功后分出10只为模型组,其余分为桂枝附子低剂量组、桂枝附子中剂量组、桂枝附子高剂量组,每组10只。给药组分别采用低、中、高给药剂量予桂枝附子配伍灌胃给药,正常组、模型组灌以等量生理盐水,给药容积为1ml/100g。每日1次,连续4周。用0.3%戊巴比妥钠30mg/kg对大鼠进行腹腔麻醉,切开腹腔,用手术器械分开腹腔脏器,露出腹主动脉,并进行结扎,然后用采血针进行腹主动脉取血,取动脉血约5ml,在离心机上2000 r/min离心10min后,取上清液(血清)。通过ELISA法分析,将桂枝附子组含药血清与同等条件下提取的正常组血清和模型组血清比较,测定大鼠给药后血清中的OPG、RANKL、RANK含量变化,考察桂枝附子配伍灌胃后的OPG/RANKL/RANK信号通路的相互作用,深入探究桂枝附子配伍治疗类风湿关节炎的骨保护作用机制。结果:(1)造模前饲料喂养后小鼠体重明显增加,II型胶原注射后,模型组、给药组可以减轻小鼠体重,组内比较无统计学意义。(2)经ELISA法检测结果分析,与正常组比较,模型组血清中OPG表达量明显减少,RANKL和RANK表达量显著升高(P<0.05);(3)与模型组相比,各给药组OPG的表达量都有增加(P<0.05),而RANK和RANKL的表达量则相对减少(P<0.05);(4)桂枝附子低、中、高剂量组比较,中、高剂量组的OPG表达量明显高于低剂量组,且随着剂量的增加,OPG表达呈递增趋势,RANK和RANKL表达则呈下降趋势。结论:(1)实验研究表明由于造模后大鼠骨侵蚀加重,影响大鼠正常生长发育,大鼠体重相较于正常组增长缓慢;(2)桂枝附子配伍可以促进OPG的分泌,竞争性结合RANKL,减少RANK与RANKL的结合,抑制破骨细胞分化,从而有效抑制骨侵蚀。实验中低、中、高剂量的桂枝附子配伍均影响OPG/RANKL/RANK信号通路,并且随着桂枝附子配伍剂量的增加效果越明显,所以桂枝附子治疗RA的骨保护作用机制,可以通过调控OPG/RANKL/RANK信号通道使OPG表达增加、RANK和RANKL的表达下降来实现。