提高番茄耐盐及抗旱性的转基因技术研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:hwhxl0
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究采用的耐盐抗旱基因Force是从拟南芥中分离出的一种携带转录辅因子的AT-hook DNA突变体,通过将此基因重组连接表达载体pBIN19,再利用农杆菌介导的番茄叶盘转化法来获取番茄转基因植株,在对番茄Money maker品种进行耐盐抗旱基因Force的遗传转化中,得到的主要研究结果如下:1、将基因Force成功重组连接于表达载体pBIN19。然后通过电击转化法,将所重组构建的载体质粒转入到农杆菌LAB4404菌株中,得到含有Force基因的工程农杆菌;提取所得质粒DNA,通过PCR,且XbaI, SmaI双酶切质粒DNA,双重验证鉴定结果表明Force基因已插入到pBIN19载体中,表明已经成功构建了实验必需的含有目的基因Force的表达载体,同时也成功构建含有目的基因Force的工程农杆菌。2、实验借鉴前人研究经验,成功优化构建了高效的番茄转化再生体系。此体系的重要性得到了极大的体现,从质粒载体成功构建,到获得转基因T0代植株,必须通过番茄的高效再生遗传转化体系,否则一切都不能实现。通过对生长激素Trans-zeatin的使用,大大增加了出愈率和出芽率,使用抗生素Tim对所得转基因苗进行连续地筛选,同时确定潮霉素Hyg对于番茄Money maker品种的适宜选择压为5mg/L。且在生根阶段使用激素IBA促进转基因苗的生根,大大提高了阳性转基因苗的数目;从而减少了实验后期的鉴定和栽培管理的工作量。3、得到了含有耐盐抗旱Force基因的16株T0代转基因苗,且收获了T1代种子,为下一步获得优良、稳定的耐盐抗旱遗传特性的品种打下了基础。转基因植株的基因型上,PCR鉴定证实Force基因在番茄基因组中得到了整合,且对植株进行RT-PCR分析,检测结果表明导入的Force基因能在番茄T0代中有不同程度的表达。最后通过Southern印迹杂交检测发现基因组DNA经SmaI单酶切后,外源DNA在番茄基因组中有不同的插入位点,确证目的基因Force已插入并整合到番茄基因组上。转基因植株的表型上,植株大部分表现为枝叶生长旺盛,株型高大粗壮,具有很多丛生且皱簇的叶子,且叶片面积较大,完全符合Force基因在拟南芥植株中叶片的生理特性。
其他文献
利用自交不亲和系配制杂交种是甘蓝杂交种生产的主要技术手段之一,但由于自交不亲和系本身花期亲和力低、结籽能力差,因此需要人工蕾期授粉繁育亲本,费时费工,增加了制种成本
枇杷[Eriobotra japonica(Thunb.)Lindl]是原产于我国南方的亚热带常绿果树,具有较高的药用价值和食用价值。前期研究表明,随着果实生长发育和采后成熟衰老,糖、有机酸、酚类
2011年,由中国工艺美术学会雕塑专业委员会、《雕塑》杂志社,枣庄市委宣传部以及枣庄市文联主办的第17届中国雕塑论坛“雕塑与空间”在山东省枣庄市台儿庄古城召开。12月18日,雕