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抑郁症是一种常见的心境障碍,以显著而持久的心境低落为主要临床特征,严重者可出现自杀念头和行为。抑郁症与癌症及艾滋病并驾齐驱,被公认为是新世纪的三大疾病。随着人们工作、生活压力的增大,抑郁症患者逐年增加,已经成为一个全球性的社会和经济问题,亟待解决。而其发病机制极其复杂,国内外研究中尚未有确切阐述,以单胺假说为主的各种假说推动着抑郁症研究的进步。柴胡疏肝散(Chaihu shugan powder, CSGS)是具有疏肝理气的代表方剂,由柴胡、陈皮、川芎、香附、枳壳、白芍、甘草组成,在治疗抑郁症方面已取得较好的临床疗效,但其作用机制尚不明确。传统的用药方法为水煎剂或散剂,本课题组前期的工作优化了柴胡疏肝散的提取工艺,柴胡疏肝散醇提物有效成分的含量明显优于水提物且物质组成也发生了改变。本实验采用醇提法制备,通过对抑郁模型小鼠的行为学指标影响、脑内单胺类神经递质及其代谢物含量的检测以及部分体内体外抗氧化实验的研究,探讨CSGS醇提物对抑郁症的治疗作用及其可能的作用机制。选用昆明种小鼠84只,随机分为7组：正常组、模型组、水提组(Water formulation group, WF组)、同等柴胡皂苷a含量组(1.6g-kg-1, The same content of saikosaponin a group, SA组)、醇提物(Alcohol formulation group, AF组)4.1,8.2,16.4g·kg-1剂量组。进行以下实验。1对抑郁模型小鼠的行为学指标影响采用慢性不可预见温和应激法(Chronic unpredictable mild stress, CUMS)与慢性束缚应激法(Chronic restraint stress, CRS)相结合复制小鼠抑郁模型,采用体重增长趋势、蔗糖饮水试验、旷野实验、情绪性行为评分、悬尾实验、强迫游泳实验来评价模型是否复制成功。结果显示,CUMS与CRS相结合可以导致小鼠抑郁：与正常组相比,模型组小鼠体重增长趋势明显减慢(P<0.01)；在蔗糖饮水实验中,模型组小鼠的蔗糖水偏嗜度明显下降；在旷野实验中,模型组小鼠水平运动次数和垂直运动次数均明显下降(P<0.01,P<0.05)；在情绪性行为评分实验中,模型组小鼠情绪评分较低(P<0.05)；在悬尾实验中,模型组小鼠的悬尾不动时间明显升高(P<0.01)；在强迫游泳实验中,模型组小鼠的游泳不动时间明显升高(P<0.01)。与模型组相比,水提组、SA组和醇提物4.1,8.2,16.4g·kg1剂量组均可改善小鼠的抑郁症状(P<0.05,P<0.01),具有剂量相关性,而且同是8.2g·kg-1的生药量,与水提物比较,醇提物组小鼠实验第28天体重明显高于水提组(P<0.05),旷野实验中水平运动次数明显高于水提组(P<0.05),强迫游泳实验中游泳不动时间明显低于水提组(P<0.05)。2对抑郁模型小鼠的脑内单胺类神经递质及其代谢物含量的影响采用高效液相色谱-电化学检测法测定小鼠的脑内单胺类神经递质及其代谢物含量。其色谱条件为：色谱柱：Hypersil BDS C18(4.6mm×250mm,5μm);柱温：40℃；流动相：50mmol·L-1的乙酸钠缓冲液(含20mg·L-1Na2EDTA,20mg·L-1辛烷磺酸钠)-甲醇(90：10,V/V),加浓磷酸调节至pH3.5；流速：0.8ml·min-1;电极电势为+600mV,进样量为10μl。结果显示,本造模方法可以导致小鼠脑内单胺类神经递质去甲肾上腺素(Norepinephrine, NE)、多巴胺(Dopamine, DA)、5-羟色胺(Serotonin,5-HT)明显降低(P<0.05,P<0.01),代谢物3,4-二羟基苯乙酸(3,4-dihydroxyphenylacetic acid, DOPAC)、5-羟基吲哚乙酸(5-hydroxy-indol-acetic acid,5-HIAA)明显升高(P<0.01),DOPAC/DA及5-HIAA/5-HT明显升高(P<0.01)。与模型组相比,各给药组神经递质及其代谢物都有不同程度回调：醇提物8.2,16.4g·kg-1剂量组DA有显著差异(P<0.05)；醇提物16.4g·kg-1剂量组5-HT有显著差异(P<0.01)；各给药组DOPAC均有显著差异(P<0.01,P<0.05)；水提组与醇提物8.2g·kg-1剂量组5-HIAA有显著差异(P<0.05)；除SA组外,各给药组DOPAC/DA及5-HIAA/5-HT均显著下降(P<0.01,P<0.05)。3对抑郁模型小鼠肝组织SOD. CAT酶活性的影响采用紫外-可见分光光度法检测小鼠肝组织中氧化酶活性。检测超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)采用邻苯三酚法,检测过氧化氢酶(Catalase, CAT)采用钼酸铵法。结果显示,本造模方法可以导致小鼠肝组织SOD. CAT活性显著下降(P<0.01)。与模型组相比,醇提物8.2,16.4g·kg-1剂量组SOD活性显著升高(P<0.01),各给药组CAT活性均显著升高(P<0.05,P<0.01)。与水提物相比,醇提物8.2g·kg-1剂量组两种酶活性均较高(P<0.05,P<0.01)。4体外抗氧化能力的测定采用紫外-可见分光光度法检测醇提物的体外抗氧化能力。分别检测DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl)、·OH (Hydroxyl radical)、O2-·(Superoxide anion radical),并用维生素C (Vitamin C, Vc)作为阳性对照。结果显示,CSGS醇提物的IC50分别为0.75μg·ml-1(DPPH)、35.01mg·mL-1(OH)、52.17mg·ml-1(O2-·); Vc的IC50分别为5.79μg·ml-1(DPPH)、0.108mg-ml-1(·OH)、0.152mg·ml-1(O2-·)。其中CSGS醇提物对DPPH的IC50甚至低于Vc。综上所述,本实验通过CUMS与CRS相结合方法成功复制了小鼠抑郁模型。行为学实验证实了模型复制成功,同时也说明CSGS醇提物具有抗抑郁作用。CSGS对DA和5-HT的代谢紊乱有改善作用,但对NE作用不显著。CSGS具有较好的体内外抗氧化活性,其抗抑郁作用机制可能与抗氧化有关。