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催化荧光光度法属于分析化学中动力学分析的一个分支,是一门近代发展起来的新的测试技术。由于其具有仪器设备简单,操作简便且灵敏度高等特点,因此发展速度很快。催化荧光分析法以其具有检出限低和灵敏度高的优势,在解决痕量分析利微量分析中发挥着愈来愈重要的作用。 本课题根据有机物在催化反应中的作川,采用催化荧光动力学分析方法系统地对有机物的测定进行研究。通过比较两种过氧化物模拟酶在酶催化分析中的催化活性,建立了过氧化物模拟酶催化测定酶联耦合反应中相关物质的新体系,并用于实际样品待测物质的测定;同时还对催化反应机理进行初步探讨。开发了催化荧光动力学测定有机物的方法,拓广了其在有机分析中的应剧范围,有利于促进催化荧光动力学的发展。本文主要研究了催化荧光法在测定痕量有机催化剂甲醛、L-半胱氨酸,活化剂抗坏血酸,以及分别利用过氧化物模拟酶血红蛋白、氯化血红素与葡萄糖氧化酶偶联法测定葡萄糖方面的应用。全文主要分如下几部分:
论文第一章在查阅大量文献的基础上,对催化荧光分析法的应用和发展进行了综合评述,并对其应用前景加以展望。
第二章提出了有机催化剂甲醛与L-半胱氨酸的测定新方法。首先,在稀H<,2>SO<,4>溶液中,甲醛可以催化溴酸钾氧化灿烂甲酚蓝的反应,使其荧光淬灭,据此建立了一种催化荧光动力学测定甲醛的方法。方法的线性范围0.020-1.026lμg/mL,检出限为5.3x10<-3>μg/mL,RSD<1.67%。该方法灵敏度高,选择性好。用于实际水样中痕量甲醛的测定,同收率在90.0%-103.3%之间。其次,在pH为1.1的HCI-KCI缓冲溶液中,L-半胱氨酸可以催化溴酸钾氧化灿烂甲酚蓝的反应,使其荧光淬灭,据此建立了一种催化荧光动力学测定L-半胱氨酸的新方法。系统研究了不同环境介质与干扰物质对荧光强度的影响。方法的线性范同0.032-1.60μg/mL,检出限为0.0lμg/mL,RSD<5.67%。方法简便快捷,体系稳定。用于果汁与蜂蜜中L-半胱氨酸的测定,回收率在99.3%-104.0%之间,结果满意。 第三章基于KH<,2>PO<,4>-HCl介质中,抗坏血酸能活化钒催化溴酸钾氧化罗丹明B的反应,使其荧光淬灭,建立了活化剂抗坏血酸的测定新方法。本章采用时间驱动技术与动力学中斜率法相结合的研究方法,实时监测荧光强度的变化,测定加入活化剂前后的反应速率著值,该法能直观的再现反应过程中荧光强度的变化,不需控制反应时间,消除了催化反应时间不易控制的问题。方法选择性、精密度均较固定时间法好。
考虑到血红蛋白(Hb)和氯化血红素(Hemin)均具有典型的天然过氧化物酶辣根过氧化物酶(HRP)的催化特性,第四章采用Hb和Hemin分别作为过氧化物模拟酶催化H<,2>O<,2>氧化酪氨酸的反应,发现Hb和Hemin均具有良好的酶催化活性。我们利用荧光为检测手段,研究了Hb-H<,2>O<,2>-Tyr反应体系和Hemin-H<,2>O<,2>-Tyr反应体系的酶催化反应动力学行为,获得了它们作为过氧化物模拟酶的一些动力学反应参数,比较了二种模拟酶的催化活性,发现血红蛋白比氯化血红素催化活性稍人,二者分别与葡萄糖氧化酶(GOD)偶联,测定了果蔬组织液中的葡萄糖。在最佳实验条件下,前者葡萄糖线性范围是0-1.2×10<-4>mol/L,检出限1.33×10<-8>mol/L,对于4.0×10<-6>mol/L葡萄糖溶液RSD(n=9)为3.79%;后者葡萄糖的线性范围是0-2.0×10<-4>mol/L,检出限1.415×10<-7>mol/L,6.0×10<-6>mol/L的葡萄糖溶液其RSD(n=8)为4.82%。