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一、研究目的:在阐明糖尿病创面愈合过程中AGEs-RAGE对创面炎症/修复平衡影响的基础上,观察愈合过程中巨噬细胞浸润及功能状态的改变,并进一步揭示AGEs-RAGE效应——巨噬细胞功能状态——创面炎症/修复失衡的调控效应,为终止糖尿病创面异常炎症反应、促使创面修复的临床干预手段提供有效靶点。二、研究方法:1.AGEs-RAGE对糖尿病创面炎症反应的影响。在建立糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面模型的基础上,观察局部阻断RAGE受体后对糖尿病创面愈合进程、炎症细胞浸润及炎症因子分泌的影响,推测RAGE途径对创面炎症反应的可能影响和效应环节。2.糖尿病创面中巨噬细胞浸润及功能变化。观察糖尿病创面愈合过程中巨噬细胞浸润、巨噬细胞对于中性粒细胞的吞噬以及巨噬细胞极化表型的变化。3.AGEs-RAGE对巨噬细胞功能状态的影响。体外通过siRNA转染技术阻断RAGE受体后,观察AGEs-RAGE对巨噬细胞吞噬能力、极化表型和细胞因子(炎症因子和生长因子)分泌的影响;在糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面模型上,观察局部阻断RAGE受体后创面中巨噬细胞浸润、巨噬细胞对中性粒细胞的吞噬、巨噬细胞极化表型的改变。三、结果:1.AGEs蓄积的糖尿病创面环境下,在创面愈合过程中,伤后第3天,创面组织中仍有大量中性粒细胞浸润;创面组织炎症因子TNF-α,IL-1α,IL-6水平表现为伤后第1天的分泌不足和伤后第3天的消退迟滞,且均呈RAGE受体依赖性。2.AGEs蓄积的糖尿病创面环境下,相较于正常创面组织,伤后第3天,糖尿病创面巨噬细胞对中性粒细胞的吞噬存在着一定的缺乏,伤后第7天,M1数量增多,M2数量减少,表现为M1的持续浸润和M2型的相对缺乏即“促炎表型持续存在”的现象。3.AGEs-RAGE削弱了巨噬细胞(M0、M1)的吞噬能力、抑制巨噬细胞向M2表型的极化,增强了M1分泌炎症因子(TNF-α和IFN-γ)的能力,削弱了M2分泌生长因子(VEGF和PDGF)的能力。糖尿病创面局部阻断RAGE受体后,促进了早期巨噬细胞的浸润,增加了伤后第3天创面巨噬细胞对中性粒细胞的吞噬,伤后第7天创面M1数量下降,M2数量增多。四、结论:糖尿病创面环境中蓄积的AGEs经RAGE受体,通过影响巨噬细胞的功能状态,参与了糖尿病创面愈合的创面促炎/修复失衡。早期炎症反应的有效进行有助于加快糖尿病创面的愈合进程,相较于巨噬细胞功能状态更为复杂的修复阶段,炎症反应阶段是一个相对而言更为单一的干预窗口,通过调控早期炎症阶段促炎型巨噬细胞功能状态来提升糖尿病创面炎症反应的能效性不失为一个理想的切入点。