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由假古巴霜霉菌(Pseduoperonospora cubensis)引起的霜霉病是世界范围内的瓜类作物的灾害性病害。黄瓜(Cucumis stativus L.)上尤为严重，无论是保护地还是露地条件下栽培的黄瓜，发病普遍而且危害严重。利用DNA重组技术可使性状在种间转移，且受体本身主要性状不被改变，突破了远缘杂交不亲合障碍，开辟了植物育种的新途径。本试验以黄瓜、甜瓜为试材，克隆了两个eR基因，H-At2、T-At2，其中H-At2基因为首次在黄瓜中克隆，并得到编码区序列。申请了GENBANK号，分别为EF628204、EF628205。同时也克隆了黄瓜、甜瓜基因组中的At2基因，记为H’-At2、T’-At2，也申请了GENBANK号，分别为EF628206、EF628207。将H-At2、T-At2这两个基因转化到黄瓜中，期望提高黄瓜对霜霉病的抗性，获得有育种价值的黄瓜种质资源。通过提高寄主酶促活性来提高抗病性的基因，被叫做酶促抗性基因(enzymatic resistance)简称eR基因。At1、At2是编码光呼吸乙醛酸循环过氧化氢酶系中的氨基转移酶的两个基因，最近的研究表明将两个基因转化到感性甜瓜品系表现出对霜霉病高抗病性。本试验在此基础上以黄瓜、甜瓜为试材，采用RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction)方法从cDNA中克隆了eR基因—氨基转移酶基因(At2)；构建了由光合启动子PNZIP调控的At2基因的植物表达载体(PPN-At2)和植物通用表达载体PPN；利用花粉管通道技术将其导入黄瓜优良自交系中。获得了转PPN-at2 PCR阳性植株。主要研究结果如下：1．本实验重点进行了氨基转移酶基因(At2基因)的克隆及其表达载体的构建。根据甜瓜At2基因序列设计引物，从抗病黄瓜、甜瓜叶片的总RNA中，利用RT-PCR技术扩增出H-At2、T-At2编码区基因片段，克隆到PGEM-T easy载体中，经测序发现与已知的抗性At2序列具有很高的同源性。2．构建了由PNZIP的启动子调控的通用植物表达载体(PPN)及其At2基因的植物表达载体(PPN-At2)。用ScaⅠ／ScaⅡ从重组质粒中切出H-At2、T-At2基因片段，插入到PNZIP的启动子之后，获得了工程菌株，并命名为PPN-at2。3．利用花粉管通道技术对上述基因进行了黄瓜的遗传转化实验。将PPN-At2导入黄瓜优良自交系中，在经卡那霉素(KN)抗性初步筛选基础上，对抗性苗进行了PCR技术扩增，获得了5株转基因植株。其转化率在万分之二三左右。这种利用花粉管通道技术转化率为黄瓜的遗传转化拓宽了转化途径。