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目的： 通过改进型间断饮用二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)诱导大鼠原发性肝癌模型,观察大鼠肝脏在不同诱癌阶段的病理变化,同时检测Survivin和Livin在大鼠肝脏不同诱癌阶段的表达情况,旨在研究Survivin和Livin在诱导的大鼠肝细胞癌发生、发展过程中的变化,探讨Survivin和Livin作为肝癌早期诊断的标志物的可行性;收集部分临床人肝癌标本及其癌旁组织、肝良性病变组织,检测Survivin和Livin表达情况,结合肝细胞癌的临床病理参数,进一步为临床提供参考数据。同时,与大鼠Survivin和Livin表达情况进行对比分析,讨论该肝癌模型是否较全面的模拟了人肝细胞癌的发生、发展。 方法： 4周龄的雄性近交系wista大鼠80只,随机分为实验组(E组,n=68)和对照组(C组,n=12)。E组动物间断饮用0.01％二乙基亚硝胺(DEN)溶液,C组自由饮用灭菌自来水。实验中观察大鼠的一般情况,于实验第4周、8周、12周、16周、18周分别取E组大鼠12只,C组大鼠2-3只,称重后麻醉,开腹摘取大鼠肝脏,观察肝脏大体情况及组织病理学变化;分别采用免疫组织化学法和RT-PCR法检测Survivin和Livin在大鼠肝癌形成不同阶段的表达情况,并将两者在各阶段表达情况进行比较分析;用免疫组织化学方法检测Survivin和Livin蛋白在40例原发性肝癌组织及其癌旁组织、15例肝脏良性病变组织(对照组)的表达情况,实验数据结合临床病理参数进行统计学分析。 结果： 1.改进型间断饮用DEN诱导的肝癌为肝细胞癌,大鼠肝脏癌变大致经过肝细胞损伤期、肝硬化期和肝细胞癌变期三个阶段。至诱癌结束时实验组大鼠自然死亡3只,死亡率4.41%(3/68)。实验组18周诱癌结束时存活的17只大鼠16只形成肝癌,诱癌率94.12%(16/17)。 2.Survivin和Livin在正常大鼠肝脏组织不表达,随着肝癌的发生,Survivin和Livin阳性表达率和表达强度依次升高,各组间阳性率比较差异有统计学意义(p<0.5)。至诱癌晚期,可见大量Survivin和Livin阳性表达细胞,与对照组相比,Survivin和Livin在肝硬化期、肝癌变期阳性率均上升(P<0.05/3),与肝硬化组比较,肝癌变组的Survivin和Livin的阳性表达率亦出现上升(P<0.05/3)。 3.Survivin蛋白在临床肝癌、癌旁组及良性组的阳性率分别为72.50%(29/40)、37.50%(15/40)、0.00%(0/15),各组间差异有统计学意义(p<0.5)。Survivin蛋白在HCC中的表达与患者性别、年龄、HBsAg、AFP、肿瘤大小无明显相关(p﹥0.05),而与病理分级、门静脉癌栓有无相关(p<0.05)。 4.Livin蛋白的表达在临床肝癌组、癌旁组及良性组的阳性率分别为62.50%(25/40)、35.00%(14/40)、0.00%(0/15),各组间差异有统计学意义(p<0.5)。Livin蛋白在HCC中的表达与患者性别、年龄、HBsAg、AFP、肿瘤大小无明显相关(p﹥0.05),而与病理分级、门静脉癌栓有无相关(p<0.05)。 5.两者相关性:临床人肝癌组织中Survivin和Livin蛋白的表达呈正相关性(r=0.448,p=0.004)。 结论： 1.通过间断饮用二乙基亚硝胺(DEN)溶液成功建立了大鼠肝细胞癌模型,该造模方法简单,诱癌成功率高,死亡率低。肝癌是在肝硬化的基础上发生,此模型是一种较理想的研究人类肝癌的动物模型。 2.Survivin和Livin参与了肝癌的发生和发展,对于肝癌发生的各个阶段均有提示作用,可作为肝癌早期预防和诊断的潜在标志物。 3.Survivin和Livin蛋白在肝癌组表达明显高于良性对照组,说明其表达异常和失衡与肝癌的发生、发展密切相关,也提示肝癌的进展是多因素共同作用的结果。Survivin和Livin与门脉癌栓的形成及HCC的病理分级有一定的关系,提示Survivin和Livin可成为判断肝癌侵袭和转移的指标。 4.Survivin和Livin在癌旁组织中表达与对照组有统计学意义,说明阳性表达的癌旁肝硬化组织具有癌变危险性,癌旁肝组织可能是一群异常增生的肝细胞群,其中部分细胞有可能发展成为HCC。 5.大鼠肝癌的Survivin和livin蛋白表达情况和人肝癌的表达情况基本一致,表明DEN诱导的大鼠肝癌模型能较好地从分子生物层面模拟人类肝癌发生,也进一步说明了DEN诱导的大鼠肝癌模型是一种较理想的研究人类肝癌的动物模型。