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目的：研究清肝活血方及其拆方对酒精性肝病(ALD)大鼠LPS-KC信号蛋白的影响。
方法：雄性Wistar大鼠100只,SPF级,随机分成空白组、CCl4组各10只,余80只为造模组,采用复合因素复制ALD模型6周。空白组予等量生理盐水。CCl4组予微量CCl4腹腔注射2次/周。造模4周后模型大鼠随机分成4组,清肝活血方及其拆方组各15只,余为模型组。予等效剂量清肝活血方及拆方灌胃2周。检测血清ALT、AST;留取肝脏标本进行HE染色；分别采用偶氮显色法检测血浆内毒素水平,ELISA检测血浆TNF-α含量,免疫组织化学染色检测肝组织CD68、CD14表达,RT-PCR检测肝组织CD14、TLR4、TNF-αmRNA表达,Westernblot检测肝组织TLR4、P-ERK、NF-κB蛋白表达。结果采用SPSS12.0统计软件进行单因素方差分析及两两比较。
结果：
1.复合因素诱导ALD大鼠模型表现为肝细胞脂肪变性和炎细胞浸润,血清ALT、AST,血浆内毒素、TNF-α水平显著升高,肝组织中CD68、CD14、TLR4、TNF-α、P-ERK、NF-κB等基因和(或)蛋白表达显著增加。
2.清肝活血方及其拆方均可不同程度改善模型大鼠脂肪变性和炎细胞浸润程度,对血清ALT、AST,血浆内毒素、TNF-α水平的改善及LPS-KC信号传导途径相关基因和(或)蛋白的表达呈现不同的作用。
3.在抑制KC活化状态环节,活血方效果最明显,清肝活血方次之,清肝方再次之。在下调TNF-αmRNA表达、降低血浆TNF-α水平环节,清肝活血方及活血方有效,清肝方无明显作用。在下调CD14mRNA表达环节,清肝活血方及清肝方有效,活血方无明显作用；在抑制CD14表达环节,清肝活血方有效,清肝方、活血方无明显作用。在下调TLR4mRNA表达环节三方效果相似；在抑制TLR4表达环节,三方均有效,清肝活血方>清肝方>活血方,清肝活血方优于活血方。在抑制P-ERK表达环节三方效果相似。在抑制NF-κB表达环节,三方均有效,清肝活血方>活血方>清肝方,清肝活血方优于清肝方。
结论：
1.清肝活血方及其拆方通过调控LPS-KC信号传导途径的多环节来发挥对ALD的防治作用,其作用机理可能与降低内毒素水平、抑制KC活化状态,下调膜受体CD14、TLR4表达,抑制ERK磷酸化和NF-κB的转录,从而减少TNF-α的产生有关。
2.清肝活血方及其拆方对ALD中LPS-KC信号传导途径作用位点和强度不同。全方在降低CD14、TLR4、NF-κB表达环节优于两个拆方；活血方在抑制KC活化状态环节效果最好,在降低CD14mRNA和CD14表达环节无明显作用；清肝方在降低CD14、TNF-αmRNA和TNF-α表达环节无明显作用。