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三聚氰胺(melamine,2,4,6-triamino-s-triazine)是三嗪类化工原料,普遍应用于建材、灭火剂、纺织、皮革、造纸等行业。近年来,一些不法厂商将三聚氰胺添加到宠物食品和牛奶中引起宠物死亡和婴幼儿结石的事件已对包括畜禽养殖在内的整个食品行业产业链产生了严重冲击。为了监控三聚氰胺及其同系物在猪组织中的残留和全面了解三聚氰胺在猪体内的代谢及消除规律、三聚氰胺对猪的肾毒性,本文开展了猪组织中三聚氰胺及其同系物多残留检测方法研究以及三聚氰胺在猪体内药动学、代谢和猪肾毒性等研究,为全面评价三聚氰胺的风险提供基础数据和技术支持。
1猪组织中三聚氰胺及其同系物的检测方法研究
本研究采用MRM→IDA→EPI→谱库检索模式建立了猪组织中三聚氰胺及其同系物的液相色谱-电喷雾串联质谱多残留检测方法,结合谱库检索功能同时实现了定性定量分析。
组织样品经2％三氯乙酸、2mL乙酸铅和6mL乙腈混合溶液提取,Sepucol ENVI-CARB柱净化后,用API 40000trap进行检测。该方法在2～5000μg/L浓度范围内,线性关系良好,相关系数均大于0.9990,向组织中添加10μg/kg、50μg/kg、100μg/kg三个浓度水平5种三聚氰胺类化合物时,获得5种三聚氰胺类化合物的回收率(％)、批内变异系数(％)、批间变异系数(％)分别为:三聚氰胺95.1～99.5、2.3～5.1、5.0～10.3;环丙胺嗪95.2～99.9、2.1～6.3、5.3～9.3,三聚氰酸二酰胺94.6～99.5、2.2～6.9、5.1～11.3;三聚氰酸-酰胺94.2～99.7、2.7～7.2、5.9～11.1;三聚氰酸94.5～99.8、2.8～7.3、6.3～10.7。5种三聚氰胺类化合物的检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为:环丙氨嗪1.20μg/kg、10μg/kg;三聚氰胺1.15μg/kg、10μg/kg:三聚氰酸二酰胺1.25μg/kg、10μg/kg:三聚氰酸-酰胺1.55μg/kg、10μg/kg;三聚氰酸1.75μg/kg、10μg/kg。
2三聚氰胺在猪体内的药代动力学研究
12头猪随机分为2组,6头猪静脉注射2.5mg/kg.b.w三聚氰胺,另外6头猪内服20mg/kg.b.w的三聚氰胺。结果表明,单剂量耳缘静脉注射三聚氰胺后猪血浆中的三聚氰胺的药时数据可以用静脉注射三室模型解析,其主要药动学参数为:t1/2α为3.87h,t1/2β为6.85h,Vd为0.30L·kg-1,ClB为0.028L·kg-1·h-1,AUC为92.86μg·mL·h,MRT为8.12h,Co为17.15μg·mL-1;内服三聚氰胺后猪血浆中三聚氰胺的药时数据可以用一级吸收一室模型来解析,其主要药动学参数为:t1/2ka为0.30h,t1/2ke为7.20h,Tmax为1.48h,Cmax为14.55μg·mL-1,AUC为173.15μg·mL-1·h,F为23.31％。三聚氰胺在猪体内的主要药动学特征为:吸收迅速,达峰时间短,消除速度快。
3三聚氰胺在猪体内代谢的初步研究
10头幼龄猪按500m/kg.b.w内服给予三聚氰胺溶液后,分别收集尿样、粪便和内脏样品进行分析。结果表明三聚氰胺在猪体内主要以原形的形式存在,不发生水解。研究发现有极少量的三聚氰胺羟基化代谢物和三聚氰胺与苯二氧乙酸的结合物。
4三聚氰胺对猪肾的毒性研究
通过连续拌料饲喂猪20mg/kg、200mg/kg和2000mg/kg三个浓度三聚氰胺一个月,饲料中添加20mg/kg、200mg/kg试验组与对照组相组织结构无显著差异,2000mg/kg试验组的肾脏组织学、病理学变化主要表现在是肾脏和膀胱出现出血点、肾淋巴细胞增生、肾小球坏死、肾远曲小管和近曲小管均发现结晶等,在本试验条件下,肾结晶可能是由三聚氰胺与邻苯二氧乙酸和多价会属离子形成的聚合物引起。