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龋齿和牙周病是目前世界范围内的临床最常见的空腔疾病,都是细菌诱导性疾病。龋齿,俗称蛀牙或虫牙,其形成与口腔卫生不良,大量的糖类残留和积累以及口中细菌的滋生是分不开的,其中表兄链球菌(Streptococcus sobrinus)是非常重要的致病菌,能够产生大量的葡糖基转移酶(glucosyltransferase, GTF),可以将蔗糖等转化成有一定粘性的葡聚糖(glucan)并能够产生酸性物质破环牙齿;而葡聚糖在牙菌斑的形成以及细菌附着滋生的过程中起到很重要的作用。牙周病是是导致人类牙齿丧失的最重要原因,一般分为两个阶段:齿龈炎和牙周炎;牙周病是由牙菌斑中某些致病菌引起的,尤其是牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis),当细菌积累到一定程度,会导致局部牙周组织上皮细胞发生炎症反应,产生大量的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs),而基质金属蛋白酶能够裂解细胞基质的重要成分:胶原蛋白,导致齿龈炎的发生,如得不到及时的治疗,齿龈炎将进一步发展为牙周炎。本实验针对两种主要的病原菌:表兄链球菌(S. sobrinus)和牙龈卟啉单胞菌(P. gingivalis)以及两种主要的病原酶:葡糖基转移酶(GTF)和基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)进行抑制试验,样品为48种植物精油,实验结果如下:1、植物精油对抑制龋齿和牙周病关键酶的活性的筛选在本实验锅中,共有48种植物精汕样品被用于测定是否对葡糖基转移酶(GTF)的活性具有抑制作用。实验结果表明,共有12中植物精油对葡糖基转移酶(GTF)的抑制率超过20%,分别是白柏松精油,德国甘洋菊精油,印度乳香木精油,生姜精油,日本五针松精油,冷杉精油,索马里没药精油,广藿香精油,西班牙迷迭香精油,日本柳杉(树枝)精油,日本柳杉(树叶)精油和香根草精油;其中抑制率超过40%的只有2个,分别是广藿香精油(40.8%)和香根草精油(44.0%);活性抑制的筛选结果不甚理想。同时,依据上述实验结果选取10种活性相对较好的植物精油用于测定对基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的抑制活性,实验结果表明,除了索马里没药精油体现出了一定的抑制活性,抑制率为37.5%,其他九种植物精油样品均未表现出明显的抑制活性,筛选结果不甚理想。2、植物精油的抑菌活性筛选在本实验中,针对表兄链球菌(S. sobrinus)和牙龈卟啉单胞菌(P. gingivalis)这两种最常见的口腔病原菌,用48种植物精油样品进行抑菌活性筛选。其中,罗汉柏精油和澳大利亚蓝丝柏精油对表兄链球菌(S. sobrinus)对细菌生长的抑制作用最好,最小抑制浓度(MIC)分别为1mg/ml和0.5mg/ml,最小杀菌浓度(MBC)分别为1mg/ml和2mg/ml;同时,罗汉柏精油也是对牙龈卟啉单胞菌(P. gingivalis)抑制效果最好的植物精油样品,最小抑制浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别为1mg/ml和4mg/ml。故本次实验会将罗汉柏精油和澳大利亚蓝丝柏精油作为主要的研究对象进一步用于有效单体化合物的分离和提纯。3、有效单体化合物的分离提取实验本实验通过硅胶柱层析法和高效液相分离色谱法反复多次的一步步的对罗汉柏精油和澳大利亚蓝丝柏精油进行单体化合物的分离,得到了五个有效地单.体化合物,分别是(-)-罗汉柏烯,(+)-花侧柏烯,(+)-花侧柏醇,(-)-愈创醇和一个新的倍半萜类化合物,其中,前三个单体化合物是从罗汉柏精油中分离得到的,后两个单体化合物是从澳大利亚蓝丝柏精油中分离得到的;然后,只有前两个化合物对牙龈卟啉单胞菌(P. gingivalis)有抑制作用,最小抑制浓度(MIC)分别为:0.5 mg/ml和4 mg/ml,后三个单体化合物则只对表兄链球菌(S. sobrinus)有抑制作用,最小抑制浓度(MIC)分别为:0.125 mg/ml,0.25 mg/ml和0.5 mg/ml.