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研究目的研究外用复方紫草油治疗小儿尿布皮炎(Diaper Dermatitis,DD)的抗炎机制,旨在为复方紫草油外用治疗小儿DD提供实验研究依据。研究方法1.采用Rev Man 5.3软件进行Meta分析评估外用复方紫草油治疗小儿DD的临床有效性和安全性;并从“火郁发之”认识复方紫草油治疗小儿DD。2.根据小儿DD多属变应性接触性皮炎(allergic contact dermatitis,ACD),借用幼龄小鼠ACD模型作为小儿DD模型,并以幼龄小鼠急性耳廓肿胀动物模型、幼龄小鼠皮肤毛细血管通透性亢进动物模型作为补充,联合评价外用复方紫草油治疗小儿DD的抗炎作用;并采用HE染色观察幼龄小鼠耳廓组织的病理形态,硝酸还原酶法检测幼龄小鼠血清NO含量,ELISA法检测血清IL-1β、TNF-α和IL6-的蛋白含量,免疫组化检测耳廓组织P2X7受体和NF-κ B/p65的表达,RT-PCR检测耳廓组织P2X7受体mRNA和NF-κ B/p65mRNA的水平,从P2X7受体/NF-κB 细胞通路探讨外用复方紫草油治疗小儿DD的抗炎作用机理。研究结果1.外用复方紫草油治疗小儿DD的Meta分析结果:研究共纳入11项RCT,合计小儿DD1468例;外用复方紫草油治疗小儿DD,与局部其他治疗(外用菜籽油、香油、护臀霜、鞣酸软膏、氧化锌油、红霉素软膏或炉甘石洗剂)相比,在临床有效率、痊愈率和平均痊愈天数方面的差异均有统计学意义(P<0.01)。11项RCT共计治疗组802例,均未提及有不良反应。2.从“火郁发之”理论认识复方紫草油治疗小儿DD:复方紫草油以紫草为君,忍冬藤、白芷为臣,麻油为佐,冰片为使;方中各药都有良好的抗炎作用,能快速修复炎性皮肤。全方功效为清热凉血解毒,散风除湿消肿,佐以润肤生肌,遵从“火郁发之”之旨,凉之、清之、散之、润之,将小儿DD之“郁火”因势利导而解。3.实验一外用复方紫草油对幼龄小鼠ACD的影响外用复方紫草油对幼龄小鼠ACD影响的系列实验,结果为:与模型组相比,外用复方紫草油对幼龄小鼠ACD耳肿胀度有明显抑制作用(P<0.01),而麻油对耳肿胀度的抑制作用尚不能认为差别有统计学意义(P>0.05);外用复方紫草油能明显降低幼龄小鼠ACD血清IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白含量(P<0.01),而麻油降低血清IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白含量尚不能认为差别有统计学意义(P>0 0.05);外用复方紫草油能明显降低幼龄小鼠ACD血清N0含量(P<0.01),而麻油降低血清N0含量尚不能认为差别有统计学意义(P>0.05)。经HE染色,镜下见醋酸氟轻松乳膏组、复方紫草油高浓度组(2倍浓度)和复方紫草油组给药后耳廓肿胀、充血及炎细胞浸润程度显著好转。经免疫组化检测,镜下见醋酸氟轻松乳膏组、复方紫草油高浓度组和复方紫草油组随着炎症的显著好转P2X7受体、NF-κ B/p65阳性表达也显著减弱。经RT-PCR检测,模型组幼龄小鼠耳廓肿胀组织P2X7受体mRNA表达水平明显高于正常组(P<0.01),模型组幼龄小鼠耳廓肿胀组织NF-κ B/p65 mRNA表达水平明显高于正常组(P<0.0 5);与模型组比较,醋酸氟轻松乳膏组、复方紫草油高浓度组、复方紫草油组幼龄小鼠耳廓肿胀组织P2X7受体mRNA表达水平明显降低(P<0 0.05),醋酸氟轻松乳膏组、紫草油组、复方紫草油高浓度组、复方紫草油组幼龄小鼠耳廓肿胀组织NF-κ B/p65 mRNA表达水平也明显降低(P<0.05);而麻油组、紫草油组、复方紫草油低浓度组P2X7受体mRNA表达水平和麻油组、复方紫草油低浓度组NF-κ B/p 6 5 mRNA表达水平均较模型组有不同程度的降低,但尚不能认为差别有统计学意义(P>0.05)。4.实验二外用复方紫草油对幼龄小鼠急性耳廓肿胀的影响外用复方紫草油对幼龄小鼠急性耳廓肿胀影响的系列实验,结果为:与模型组相比,预防性或治疗性外用复方紫草油对二甲苯所致幼龄小鼠耳廓肿胀的抑制作用尚不能认为差别有统计学意义(P>0.05)。与模型组相比,预防性或治疗性外用复方紫草油对巴豆油所致幼龄小鼠耳廓肿胀均有明显抑制作用(P<0.01)。治疗性外用复方紫草油能明显降低巴豆油所致耳廓肿胀幼龄小鼠血清TNFα-、IL-6蛋白含量(P<0.01);能明显降低幼龄小鼠血清NO含量(P<0.01)。经HE染色,镜下见复方紫草油给药后耳廓肿胀、充血及炎细胞浸润程度显著好转。经免疫组化检测,镜下见复方紫草油给药后随着炎症的显著好转P2X7受体阳性表达也显著减弱。5.实验三外用复方紫草油对幼龄小鼠皮肤毛细血管通透性亢进的影响:与模型组相比,外用复方紫草油对二甲苯所致幼龄小鼠皮肤毛细血管通透性亢进有明显抑制作用(P<0 0.05),而外用麻油、紫草油、复方紫草油低浓度液(1/2倍浓度)对二甲苯所致幼龄小鼠皮肤毛细血管通透性亢进尚的抑制作用不能认为差别有统计学意义(P>0.05)。研究结论1.外用复方紫草油治疗小儿DD的Meta分析,得出:局部外用复方紫草油治疗小儿DD能明显提高临床有效率、治愈率,明显缩短治疗时间,而且尚未发现不良反应。2.基于“火郁发之”理论认识复方紫草油治疗小儿DD,得出:复方紫草油适用于治疗小儿DD,而且方中各药都具有良好的抗炎作用。3.外用复方紫草油对幼龄小鼠ACD影响的系列实验,得出外用复方紫草油对幼龄小鼠ACD具有治疗作用,其抗炎作用机制与降低幼龄小鼠血清N0含量,降低血清1L-1β、TNF-α、IL-6的蛋白含量,拮抗组织P2X7受体、NF-κ B/p65的表达,降低组织P2X7受体mRNA、NF-κ B/p65 mRNA的水平有关,可能是通过抑制P2X7受体/NF-κ B细胞通路来发挥抗炎作用。4.外用复方紫草油对幼龄小鼠急性耳廓肿胀影响的系列实验,得出:外用复方紫草油对幼龄小鼠急性耳廓炎症具有预防和治疗作用,其作用机制可能与降低血清NO含量,降低血清TNF-α、IL-6的蛋白含量,拮抗组织P2X7受体表达有关。5,外用复方紫草油对幼龄小鼠皮肤毛细血管通透性亢进影响的实验,得出:外用复方紫草油对幼龄小鼠急性皮肤毛细血管通透性亢进具有改善作用。研究总结论:外用复方紫草油治疗小儿DD具有良好的抗炎作用,这可能与其抑制P2X7受体/NF-κ B细胞通路有关。