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研究背景 哮喘是由嗜酸性粒细胞（Eos）活化和在肺内募集所导致的一种慢性气道变应性炎症，并伴有气流的可逆性受限和气道高反应性（AHR），其中最主要的免疫学异常是Th1／Th2平衡失调，Th2细胞和Th2型细胞因子在哮喘的发病机制中起了关键作用。随着气道炎症学说的确立，抗炎治疗得到了广泛应用并在临床实践中取得了良好疗效。但是，吸入激素并不能从根本上逆转哮喘的自然病程，不能纠正潜在的免疫失调，而且全身性的副作用近来也有报道，如肾上腺皮质轴功能下调，骨代谢异常，生长发育迟缓，尤其表现在儿童中。因此，寻求一种新的或是替换方法来控制该病就显得尤为重要。传统的中医中药已引起了众多学者的广泛兴趣，有学者报道运用一些治疗哮喘的中草药不仅能改善患者的临床症状、减少激素和β2-受体激动剂的用量，而且还能提高PEF容量、并在动物模型上降低AHR、抑制Eos的浸润，提示了中医药防治哮喘有着极大的潜力和广阔的前景。但是，目前很少有经过严谨设计的实验研究来探讨中草药治疗哮喘的有效性和作用机制。本研究通过建立稳定的小鼠哮喘模型，观察清肺止哮汤对支气管肺泡灌洗液（BALF）、 浙江大学2002年硕士学位论文 肺组织、骨髓中E。s的影响，旨在明确其对哮喘气道炎症的抑制作用，并进 一步运用流式细胞术来测定外周血中Thl／ThZ平衡的变化，以了解其作用机 制。 研究方法 选择C57BL／6小鼠，年龄6．8周，雄性，体重约18－22克，随机分为六 组：抗原卵白蛋白致敏激发组（Ovalbumin sensitized group，Ow组）、正常对 照组（Normal contral group，NC组）、布地奈德处理组（Budesonlde treat group， sv．－－组）、中药清 月止哮汤处理组(Chinese herbal medicine formula treat grouP， 中药组，设有小、中、大三个剂量组，其中小剂量组含生药 0 sg／ml，中剂量 组含生药 l．0 g／ml，大剂量组含生药 2．5 g／ml人 以卵白蛋白(OVAX佐剂液 态铝和生理盐水配成新鲜致敏液进行致敏和激发，正常对照组的小鼠则以生 理盐水处理。清肺止哮汤组从小鼠第一次致敏当天起，每天灌胃一次，04ml／ 次，共26天，BUD组从致敏后第23天起每天一次在乙醚吸入麻醉下予鼻腔 内滴注＊UD，剂量为350p吵g，共四人。在最后一次抗原激发后枯小时处 死各组小鼠，分别收集血、BALF和骨髓标本，计数白细胞总数和 EOs的百 分比及绝对数。最后取出肺组织固定于 10％的中性甲醛溶液中，制做石蜡切 片，然而分别行 H十染色和 l。AS染色。部分小鼠外周血采用三色流式细胞术 细胞内抗原标记检测其中 Th／ThZ平衡情况。 数据统计 实验数据采用SPSS 100统计软件进行分析，所得结果以均”数士标准误（xise）表示。各组数据先进行x’正态性检验和方差分析，若符 合正态分布和方差齐性，则采用单因素方差分析（One－Way ANOVA人 多重 比较采用LSD法；若方差不齐性，则进行多重秩和检验。取P＜0．05作为显 著性差异水平。 2 浙江大学2002年硕士学位论文 研究结果 1．清肺止哮汤对哮喘小鼠气道炎症的影响 首先确定灌胃给予清肺止哮汤抑制气道炎症的最合适剂量u．sg／mlx26 天），以此来观察中药对气道炎症、骨髓中Eos的影响。结果发现清肺止哮汤 可明显抑制BALF中白细胞总数及E。S绝对计数，尤其对E。S的抑制率达到 了90％，而对抗原激发后48小时中骨髓的有核细胞总数及E。S绝对计数均无 影响。应用清肺止哮汤能使肺组织中细支气管、血管周围的E。s浸润和粘液 的过度分泌得到抑制。同时这一结果和BUD组相比仍有显著性差异，表明清 肺止哮汤对哮喘小鼠气道炎症的抑制作用并不完全。 2．清肺止哮汤对外周血Th lffhZ平衡变化的影响 我们采用流式细胞分析法检测外周血中 Th ryhZ平衡情况，结果显示在 正常小鼠中Thl细胞比ThZ细胞多，而在哮喘小鼠模型中Thl／ThZ平衡向ThZ 优势化，经清肺止哮汤干预后发现外周血总的CD3＋T细胞，包括T。与Th中 表达IL．4的细胞群／表达WN．Y的细胞群与OVA组相比有显著性差异（P＜ 0刀 1），其中 To，Th各自细胞中表达 n－4的细胞群／表达 H7v－Y的细胞群比值 呈明显下降趋势，但是和＊VA组比较无统计学意义（P＞0刀5）。表明经清肺 止哮汤处理后使得OVA致敏激发小鼠外周血中CD3”表达fN－Y的细胞群 增?