葡萄籽原花青素分离及其对胰脂酶活性抑制功能的研究

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葡萄籽为葡萄酒厂和葡萄饮料厂的资源副产物,约占葡萄鲜重的5%左右。葡萄籽中脂肪含量约为14%~17%,其中亚油酸的含量高达68%~76%。葡萄籽中原花青素具有较强的抗氧化作用,其抗氧化、清除自由基能力达到维生素E的50倍,维生素C的20倍,同时对多种酶如胰脂酶、络氨酸酶、α-淀粉酶具有较强的抑制作用。本文利用超临界CO2流体萃取葡萄籽油脂后的葡萄籽粉为原料,采用有机溶剂萃取法和大孔树脂进行分离葡萄籽中的原花青素,探究葡萄籽原花青素对胰脂酶活性的抑制作用,确定其抑制类型及抑制常数。对脱脂葡萄籽粉中原花青素进行初步萃取。通过正交试验探究不同因素如溶剂、料液比、提取时间、提取温度、溶剂浓度等对葡萄籽中原花青素萃取效果的影响。正交试验结果确定葡萄籽中原花青素的最佳萃取工艺方案,即料液比1:10,在70%乙醇中提取2小时,提取温度为70℃,提取三次,在该工艺条件下,提取液中原花青素的含量为4.94%。通过该工艺原花青素具有提取率高、安全性高、容易操作等优点。葡萄籽原花青素的纯化工艺研究中,利用大孔吸附树脂对原花青素的特异性吸附及解吸进行原花青素的纯化。通过静态试验从8种不同树脂中筛选出最佳树脂HPD100型树脂,实验证明HPD100树脂对葡萄籽原花青素吸附量大、解吸率高、喷干后纯度高,同时该树脂机械强度大、耐酸碱,有利于葡萄籽原花青素的工业化分离。通过吸附实验确定最佳原花青素进样浓度为8.0mg/mL,上样pH值为3.0,进样流度为3.0BV/h。水洗时水洗体积为4.0BV,解吸时用60%乙醇2.0BV/h流速进行洗脱,通过该工艺方法获得的原花青素经干燥纯度达到95%以上。在葡萄籽原花青素对胰脂酶活性的抑制实验通过改变酶反应体系不同条件,探究葡萄籽原花青素对胰脂酶活性的影响。结果表明,葡萄籽原花青素在特定条件下对胰脂酶活性具有抑制作用,通过实验确定原花青素对胰脂酶的抑制常数Ki=0.1032mg/mL,改变不同抑制剂浓度与底物浓度绘制Dixon和Weaver-line图,证明原花青素对胰脂酶活性抑制属于非竞争性抑制。
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