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【背景与目的】胃癌作为最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人们的身体健康,当前针对胃癌采用了以手术局部切除为主、结合放化疗和生物免疫治疗的综合治疗,但整体疗效以及术后五年生存率尚不理想,而靶向治疗作为肿瘤治疗的新兴手段,在肿瘤综合治疗中表现出一定的优越性,受到学术界广泛的重视。PI3K/AKT/m TOR是肿瘤细胞生物学调控中的一条重要的信号传导途径。已有多项研究发现NVP-BEZ235在对多种肿瘤细胞和动物模型中表现了明显的抗肿瘤作用,但查阅国内外文献,目前在胃癌靶向治疗中,关于BEZ235的报道甚少。本实验以胃癌细胞株NCI-N87的荷瘤鼠为实验对象,探求PI3K、m TOR双重靶向抑制剂NVP-BEZ235单用或联合细胞毒药物5-FU对NCI-N87裸鼠移植瘤的影响结果,从而证实既往细胞水平实验的推测,为NVP-BEZ235对于胃癌细胞具备一定抑瘤作用提供可靠的实验依据。【方法】1.通过多次体内传代的方法获得稳定的人胃癌细胞系NCI-N87荷瘤鼠。2.瘤体达目标体积后根据体重将裸鼠随机为四组,分别以生理盐水、NVP-BEZ235、5-FU、NVP-BEZ235+5-FU干预。记录肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线。3.药物干预30天后处死裸鼠,剥离移植瘤,测瘤重,HE染色观察组织病理学形态。4.Western Blot法检测凋亡相关蛋白、PI3K/Akt/m TOR信号通路相关蛋白、侵袭相关蛋白的改变。【结果】1.随着传代次数增多,移植瘤成瘤率及增长速度明显提高,且瘤体增大速度相对稳定。移植瘤边界清晰,质地稍软,可以推动,呈球形凸出皮肤,大小存在一定差异。药物干预后可见肿瘤生长明显受限,而生理盐水组直至实验结束时,肿瘤持续增大,瘤体巨大多分叶。荷瘤鼠可出现活动减少,食欲减退,体形消瘦等恶病质表现。2.剥除移植瘤HE染色视野内可见弥漫分布异形细胞,核分裂象增多,染色深,中央可见大片坏死区域。但是胃癌特征性的腺样结构极少,且间质细胞与实质细胞分界不清。3.肿瘤生长曲线可见NVP-BEZ235+5-FU组增长曲线明显较其它三组平缓。最终肿瘤体积5-FU组、BEZ235组和联合用药组均较对照组NS组体积小,但仅联合用药组差异均有统计学显著意义(P<0.05)。4.第三代皮下移植瘤荷瘤鼠经药物干预实验结束时,对照组12只裸鼠死亡2只,存活10只,其中5FU+BEZ235联合用药组死亡一只,存活5只,其余各组裸鼠无死亡。计算抑瘤率5-FU组表现出了明显的抑瘤作用(P<0.05);BEZ235组虽表现出一定的肿瘤抑制作用,但与NS组相比差异无统计学意义(P>0.05);5-FU+BEZ235组抑瘤作用明显提高,与其他各组相比差异有统计学意义(P<0.05)。各组肿瘤称重,5-FU组及5-FU+BEZ235组瘤重较NS组较轻(P<0.05);BEZ235组与NS组相比差异无统计学意义(P>0.05);且5FU+BEZ235组瘤重较单用5-FU组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。5.Western Blot见PTEN相对表达量虽然用药组表达量均上调,但相比对照组差异并无统计学意义(P>0.05);5-FU组对p-Akt/Akt及m TOR并未表现出明显的抑制作用,同对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);BEZ235组p-Akt/Akt和m TOR显著下降(P<0.05),而在联合用药组中,p-Akt/Akt和m TOR下降更为明显,且与对照组、单用药物组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);对凋亡相关蛋白的测量可见5-FU组Bax/Bcl-2、caspase3均较对照组显著上升(P<0.05),联合用药组较对照组、5-FU组、和BEZ235组Bax/Bcl-2、caspase3上升,且差异有统计学意义(P<0.05);测量侵袭相关蛋白见用药组VEGF均较对照组表达显著降低(P<0.05),且联合用药组较5-FU和BEZ235组均低(P<0.05)。【结论】1.NVP-BEZ235单用时抑瘤效果有限,但当BEZ235与5-FU联用时则能显著提高5-FU的抑瘤效果。2.NVP-BEZ235具有较强的抑制PI3K通路蛋白的作用,5-FU对PI3K通路蛋白抑制作用不明显,但与BEZ235联用可产生显著的抑制作用。3.NVP-BEZ235具有促肿瘤凋亡作用,且显著增强了5-FU的促凋亡效果。4.NVP-BEZ235能够抑制侵袭相关蛋白表达;且同5-FU联用具有协同作用。5.NVP-BEZ235的抗肿瘤作用依赖于其抑制肿瘤细胞的生长增殖而不是直接杀死肿瘤细胞