木犀草素抑制FUNDC1/BNIP3/BNIP3L线粒体自噬通路减轻LPS诱导的H9c2心肌样细胞炎

• 作 者: 刘云云
• 机 构: 南昌大学(医学院)
• 出 处: 南昌大学(医学院)
• 发表日期: 2020年期
• 关键词: 木犀草素

目的：
　　研究木犀草素对LPS致H9c2心肌样细胞损伤的保护作用，并从线粒体自噬通路初步探讨其机制。
　　方法：
　　(1)为确定LPS在线粒体自噬水平上的变化，先采用蛋白质印迹方法检测细胞线粒体自噬蛋白LC3、P62及Beclin1的表达水平。再利用线粒体自噬抑制剂CsA在线粒体自噬水平上对心肌样细胞进行观察；通过CCK8检测细胞的存活率，LDH检测细胞活性，CK检测心肌损伤程度，qRT-PCR检测细胞炎症因子mRNA水平表达，流式细胞术检测细胞凋亡率及线粒体膜电位变化，再通过蛋白质印迹方法检测受体介导的线粒体自噬蛋白FUNDC1、BNIP3及BNIP3L的表达水平。(2)为观察木犀草素对LPS致H9c2心肌样细胞损伤的作用，除上述检测方法外，同时用线粒体自噬荧光标记物MtphagyDye检测线粒体自噬发生的情况，再通过免疫荧光技术检测线粒体自噬蛋白FUNDC1的表达情况。(3)为确定木犀草素通过线粒体自噬起到保护作用，观察木犀草素联合线粒体自噬激动剂CCCP对LPS致H9c2心肌样细胞损伤的作用；除上述检测方法外，再通过免疫荧光技术检测线粒体自噬蛋白FUNDC1的表达情况。
　　结果：
　　(1)与对照组相比，H9c2心肌样细胞中线粒体自噬蛋白LC3Ⅱ、Beclin1表达量显著增加，P62表达量显著降低；与LPS组相比，用线粒体自噬抑制剂CsA处理后，细胞存活率显著增加，CK值及LDH活性明显降低，细胞的凋亡率显著降低，线粒体膜电位增加，炎症因子TNF-a、IL-6及IL-1bmRNA水平表达量显著降低，且受体介导的线粒体自噬蛋白FUNDC1相对增加，BNIP3及BNIP3L蛋白表达降低。
　　(2)与LPS损伤组相比，木犀草素同样能增加LPS诱导后的H9c2心肌样细胞存活率，明显降低LPS处理H9c2细胞LDH活性、CK值及细胞凋亡率，增加线粒体膜电位，炎症因子TNF-a、IL-6及IL-1bmRNA水平表达量显著降低。同时木犀草素共同作用后受体介导的线粒体自噬蛋白FUNDC1增加，BNIP3及BNIP3L蛋白表达降低；且线粒体自噬荧光标记物显示LPS组自噬显著增加，木犀草素处理后线粒体自噬荧光标记显著降低。
　　(3)自噬激动剂CCCP明显增加LPS对H9c2细胞的诱导作用。但木犀草素能明显改善线粒体自噬激动剂CCCP的作用。木犀草素相对增加LPS和CCCP
　　共同诱导后的细胞存活率，相对降低LPS和CCCP共同诱导H9c2细胞后细胞LDH活性、CK值及细胞凋亡率，增加线粒体膜电位，炎症因子TNF-a、IL-6及IL-1bmRNA表达量显著降低。同时受体介导的线粒体自噬蛋白FUNDC1相对增加，BNIP3及BNIP3L蛋白表达量相对降低。
　　结论：
　　木犀草素可改善LPS致H9c2细胞损伤，其机制可能与抑制受体介导的FUNDC1/BNIP3/BNIP3L线粒体自噬通路有关。