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目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)对体外人类视网膜色素上皮(hRPE)细胞增殖调控的剂量-效应关系、时间-效应关系以及bFGF和EGF的促增殖效应,探索体外培养hRPE细胞增殖的最佳培养浓度、作用时间以及效应较强的生长因子,为hRPE细胞替代疗法治疗视网膜变性疾病提供新思路。方法:用RPE65免疫细胞化学染色(SP二步法)鉴定确认冷冻、复苏的细胞为hRPE细胞;用CCK-8法检测不同浓度的bFGF及EGF (0,2,4,8,16,32ng/ml)在不同作用时间(0,24,48,72,96h)对hRPE增殖的影响。结果:在相同培养时间、不同浓度bFGF和EGF作用下,hRPE细胞吸光度(OD值)随bFGF和EGF的浓度增加而增加,且与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。在培养相同时间下,bFGF浓度<16ng/ml以及EGF浓度<8ng/ml的相邻浓度实验组的两组间比较差异有统计学意义(P<0.05);bFGF浓度≥16ng/ml以上以及EGF浓度≥8ng/ml的相邻浓度实验组两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。在相同浓度的bFGF或EGF作用下,hRPE细胞吸光值(OD值)随时间增加而增加,且与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);EGF作用时间在24h以上比相应的bFGF实验组的效应强,两组差异有统计学意义(P<0.05)。在培养相同时间下,浓度≥4ng/ml的EGF实验组促增殖效应比相应的bFGF实验组强,两组差异有统计学意义(P<0.05),但浓度为2ng/ml的EGF和bFGF促增殖效应的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:bFGF和EGF对体外培养hRPE细胞增生的调控都存在一定的剂量-效应关系、时间-效应关系。EGF对体外培养hRPE的促增殖效应强于bFGF。bFGF的促进作用在16ng/ml以上逐渐达到饱和;EGF的促进作用在8ng/ml以上逐渐达到饱和。研究结果提示:促体外培养hRPE细胞增殖的bFGF浓度应以16ng/ml、EGF浓度应以8ng/ml为宜。