论文部分内容阅读
过去十几年间，肥胖已经逐渐发展成为全球范围的流行趋势。尽管饮食节制和运动是防治肥胖的基本方法，药物治疗则是使病人获得长期减重效果的重要手段。胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1，GLP-1)作为一种胃肠激素可通过多种途径调节机体的能量平衡，因此成为抗肥胖治疗的重要潜在药物。我们在前期工作中发现非肽类GLP-1受体(Glucagon-like peptide-1 receptor，GLP-1R)激动剂Boc5对db/db糖尿病小鼠除具有抗糖尿病作用外，也显示了一定的减肥效果。本课题中我们选取更接近人类肥胖发病特征的高脂饮食诱导的肥胖(Diet-induced obesity，DIO)小鼠模型，重点研究Boc5的减肥作用及相关减肥机制。实验结果表明，一周三次、持续12周腹腔注射Boo5能剂量依赖性地减轻DIO小鼠的体重、减少身体质量指数和摄食量：同时能降低体脂，减轻脂肪细胞肥大和外周组织脂肪沉积；Boc5也能显著改善肥胖小鼠的血糖、糖耐量、胰岛素抵抗，提高胰岛素敏感性；Boc5(3 mg)治疗后小鼠脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取能力和脂质降解活性也得到一定恢复；Boc5还能改善血清脂肪因子(瘦素、脂联素)、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、甘油三酯、总胆固醇、游离脂肪酸、高密度脂蛋白胆固醇与低密度脂蛋白胆固醇的比值等生化指标。研究还发现限制摄食(Pair-fed)的减肥作用不及Boc5。我们的实验结果提示，Boc5可以通过多种机制发挥减肥效应，并能纠正肥胖伴随的各种代谢紊乱，因此具有重要的药用开发价值。
特发性肺纤维化(Idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)是一种以肺功能障碍为主要特征的间质性肺疾病。尽管近二十年来IPF的药物治疗取得了极大的进GLP-1R激动剂抗肥胖作用和FPRL1激动剂抗肺纤维化作用的药理学研究展，但仍然缺乏有效的干预手段。博莱霉素(Bleomycin，BLM)诱导的肺纤维化动物模型能模拟人类IPF的病理特点，因此广泛用于实验室研究。Quin-C1是本研究组通过高通量筛选，首次发现的特异性甲酰肽样受体1(Formyl peptidereceptor-like1，FPRL1)小分子激动剂，初期的体外实验证实它具有活化中性粒细胞的作用。本课题旨在观察Quin-C1对BLM诱导的肺纤维化小鼠是否具有抗炎和抗纤维化作用。实验结果发现，与模型组相比，Quin-C1(0.2 mg)能明显减少小鼠肺灌流液中性粒细胞和淋巴细胞数量，抑制肺组织细胞因子(肿瘤坏死因子、白介素-1β、转化生长因子-β1和角质细胞起源趋化因子)的生成，并能降低肺中羟脯氨酸的含量。这些成果提示Quin-C1具有一定的体内抗炎和抗纤维化活性，是治疗IPF的潜在药物。
此外，本论文工作还包括基于甲状旁腺激素1型受体(Parathyroid hormonereceptor type-1，PTHR1)的细胞水平药物筛选模型的建立。甲状旁腺激素(Parathyroid hormone，PTH)可与PTHR1(G蛋白偶联受体B家族)结合，发挥骨组织重塑和调节血钙稳态的作用，因此PTH(1-34)成为目前重要的抗骨质疏松药物。由于PTHR1肽类激动剂具有一定的临床应用限制，科研人员开始积极寻找有效的小分子激动剂。本课题的研究目的是建立以PTHR1为靶点的细胞水平的高通量筛选模型。实验中，我们将PTHR1表达载体和pCRE-Luc荧光素酶报告基因质粒共转染HEK293细胞，测得PTH(1-34)的EC50为7.75 nM，与文献报道相当。在优化实验条件(细胞密度、DMSO浓度等)后，评价了各项筛选参数，认为该模型符合高通量筛选要求，可以用于高通量药物筛选。