沙利度胺联用5-氟尿嘧啶对实验性肝癌的治疗作用及部分机制研究

• 作 者: 梅林
• 出 处: 安徽医科大学
• 发表日期: 2008年期
• 关键词: 沙利度胺 5-氟尿嘧啶 抗肝癌作用 细胞凋亡

肝癌在我国发生率较高,是一种严重威胁我国人民生命健康的疾病。对于无法手术切除的或肝癌手术切除后预防及复发转移性肝癌的治疗,化疗仍然是主要治疗手段。沙利度胺（thalidomide,THD）是一种谷氨酸衍生物,最初用于治疗妊娠呕吐,但是因为其致畸作用而于20世纪60年代初撤出市场。后来发现其对一些免疫性疾病有效。近期研究发现,THD具有抗肿瘤潜能。它通过抑制新血管产生,调节免疫功能,促进凋亡等发挥抗肝癌作用。5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-Fu）属经典的抗代谢类肿瘤化疗药,广泛用于恶性肿瘤的治疗,目前仍然是治疗原发性肝癌的主要药物之一。但其存在着毒副作用大,半衰期短,久用易耐药等缺点。本文以体内、外实验相结合,对沙利度胺联用5-氟尿嘧啶抗肝癌作用及其机制展开探讨。现分述如下:一、沙利度胺联用5-氟尿嘧啶体外抗肝癌作用采用MTT法检测沙利度胺联用5-氟尿嘧啶对体外培养的肝癌细胞株增殖抑制作用。沙利度胺联用5-氟尿嘧啶在（6.25+3.125）-（100+50）μmol·L^-1剂量下对体外培养的鼠源性HepA肝癌细胞株和人源性HepG₂肝癌细胞株均有抑制作用。药物浓度越高,抑制作用越强,有明显的量效关系。对不同的细胞系抑制作用不同,其IC₅₀值分别为:[28.9μmol·L^-1（THD）、14.4μmol·L^-1（5-Fu）],[33.9μmol·L^-1（THD）和17.0μmol·L^-1（5-Fu）],均强于单用沙利度胺(73.2,78.6μmol·L^-1)和单用5-Fu(29.2,34.9μmol·L^-1),且两药具有协同作用。以沙利度胺联用5-氟尿嘧啶（50+25）μmol·L^-1分别作用于HepA细胞和HepG₂细胞,于12,24,36,48h观察细胞生长情况,发现沙利度胺联用5-氟尿嘧啶对肿瘤细胞的抑制有明显的时间效应关系,作用时间越长,抑制作用越强。24-48h,沙利度胺联用5-氟尿嘧啶抑制作用明显强于单用相同剂量的沙利度胺或5-Fu。二、沙利度胺联用5-氟尿嘧啶体内抗肝癌作用沙利度胺联用5-氟尿嘧啶连续给药13天,对HepA肝癌模型小鼠肿瘤的生长有明显的抑制作用,沙利度胺联用5-氟尿嘧啶[（20+20）,（40+20）,（80+20）mg·kg^-1×13d]的抑瘤率分别为38.2,56.2,66.1%,其中沙利度胺联用5-氟尿嘧啶[（40+20）mg·kg^-1×13d]对肿瘤的抑制作用强于单用相同剂量的沙利度胺或5-Fu:另外,沙利度胺联用5-氟尿嘧啶能明显延长HepA肝癌模型小鼠的存活时间,沙利度胺联用5-氟尿嘧啶[（20+20）,（40+20）,（80+20）mg·kg^-1]的存活延长率分别为35.5,80.8,129.6%。三、沙利度胺联用5-氟尿嘧啶体内抗肝癌的毒副作用沙利度胺联用5-Fu[（20+20）,（40+20）,（80+20）mg·kg^-1×13d]明显增加HepA的肝癌小鼠的体重增长,且体重增长作用明显强于5-Fu 20 mg·kg^-1组。沙利度胺联用5—Fu（80+20）mg·kg^-1组能明显改善5-Fu 20 mg·kg^-1组白细胞计数的降低。另外,沙利度胺联用5-Fu（40+20）mg·kg^-1,（80+20）mg·kg^-1明显增加HepA肝癌小鼠的脾脏指数,且增长作用明显强于5-Fu 20 mg·kg^-1组。四、沙利度胺联用5-氟尿嘧啶抗肝癌作用的机制研究沙利度胺联用5-氟尿嘧啶（25+12.5）μmol·L^-1,（100+50）μmol·L^-1体外能明显抑制HepG₂细胞胸苷酸合成酶（TS）表达,且沙利度胺联用5-氟尿嘧啶（100+50）μmol·L^-1抑制作用强于相同浓度的单用5-Fu。经沙利度胺联用5-氟尿嘧啶处理后的HepG₂细胞,电子显微镜下可见典型的肿瘤细胞凋亡改变。可见体积缩小的凋亡细胞,染色质浓缩致密,并沿核膜分布形成新月状体,凋亡晚期细胞,可见细胞分解为膜包裹的凋亡小体。进行DNA标记,流式细胞仪分析凋亡改变。沙利度胺联用5-氟尿嘧啶在（6.25+3.125）.（100+50）μmol·L^-1浓度作用HepG₂细胞48h,凋亡率由10.9%上升到37.8%%,呈现明显的浓度依赖关系,且浓度为（100+50）μmol·L^-1凋亡率强于单用相同剂量的5-Fu。沙利度胺联用5-Fu（40+20）,（80+20）mg·kg^-1组明显增加HepA肝癌小鼠ConA、LPS诱导的脾淋巴细胞增殖,且明显强于单用5-Fu 20 mg·kg^-1组。另外,沙利度胺联用5-Fu（40+20）,（80+20）mg·kg^-1明显增加HepA肝癌小鼠IL-2的产生和NK细胞活性,抑制HepA肝癌小鼠异常升高的NO含量,且明显强于单用5-Fu 20 mg·kg^-1。五.结论沙利度胺联用5-氟尿嘧啶体内、外有明显的抗肝癌作用且作用强于单用沙利度胺或5-Fu,其机制可能与抑制TS的表达和增强肿瘤细胞凋亡以及调节免疫功能有关。