利用转基因和VIGS技术初步研究MgSM1、OsBIMK2和OsBIRH1在水稻中的功能

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在植物和病原物长期的斗争过程中,植物形成了一系列复杂的防御措施抵御病原物的侵袭。其中,植物能利用一些病原物激发子增强自身抗性。与此同时,植物中也存在一些基因直接地或间接地参与抗病防卫反应的调控。  MgSM1基因来源于稻瘟病菌,编码的MgSM1蛋白具有免疫诱导活性,能增强植株的抗病性。本研究将MgSM1基因克隆进含有玉蜀黍泛素启动子的载体pCoU,构建MgSM1的过量表达载体。通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导法转化水稻,经Hyg+/Cef+抗性筛选和PCR验证获得15株过量表达MgSM1 T0代转基因水稻植株。  OsBIMK2基因编码丝裂原活化蛋白激酶,在植物细胞信号传导中起着重要作用。本研究利用VIGS技术,将OsBIMK2基因沉默,离体接种稻瘟病菌和剪叶接种稻白叶枯病菌后,发现经沉默处理后的叶片比未经处理的叶片的病斑大,病情指数高,由此可以初步判断OsBIMK2具有增强抗病性的功能。进而,将OsBIMK2的过量表达基因片段和沉默小片段分别克隆进含有玉蜀黍泛素启动子的载体pCoU,构建了OsBIMK2基因的过量表达载体和沉默载体。通过根癌农杆菌介导法转化入水稻,经Hyg+/Cef+抗性筛选和PCR验证获得1株OsBIMK2过量表达T0代转基因水稻植株和6株OsBIMK2沉默T0代转基因水稻植株。  OsBIRH1基因编码水稻DEAD-box RNA解旋酶,参与转录活性的调控。本研究利用水稻VIGS技术,将OsBIRH1基因沉默,离体接种稻瘟病菌和剪叶接种稻白叶枯病菌后,发现经沉默处理后的叶片比未经处理的叶片的病斑大,病情指数高,由此可以初步判断OsBIRH1具有增强抗病性的功能。进而,将OsBIRH1的过量表达基因片段和沉默小片段分别克隆进含有玉蜀黍泛素启动子的载体pCoU,构建了OsBIRH1基因的过量表达载体和沉默载体。通过根癌农杆菌介导法转化入水稻,经Hyg+/Cef+抗性筛选和PCR验证获得4株OsBIRH1沉默T0代转基因水稻植株。  今后,将会对本研究所获得的转基因植株继续筛选,直至获得纯合体。更深入地研究这些基因在水稻抗病反应中的功能。
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