SD大鼠骨髓间充质干细胞对大鼠光损伤视网膜Bcl-2/Bax表达及血-视网膜屏障功能的影响

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目的:探讨早期静脉注射骨髓间充质干细胞(BMSCs)对光损伤视网膜凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达及血-视网膜屏障功能的影响。  方法:贴壁法分离雄性SD大鼠骨髓间充质细胞,经贴壁传代纯化后通过向成骨细胞、成脂肪细胞分化及流式细胞仪检测细胞表面抗原CD90、CD44及CD34进行BMSCs鉴定,采用Y染色体标记法追踪移植BMSCs细胞。雌性大鼠随机分为移植组、单纯光照组及对照组,单纯光照组及移植组大鼠经散瞳后进行10000lux强光照射(12h光照,12h避光,连续14d),对照组不接受照射。移植组于光照后24h、48h分别经尾静脉注射雄性SD大鼠骨髓间充质干细胞,单纯光照组与对照组仅接受等体积的PBS注射。分别于第1d、2d、3d、5d、7d、14d摘除各组大鼠眼球,HE染色观察视网膜各层结构变化,电镜观察视网膜超微结构变化,采用Evans蓝灌注观察血-视网膜屏障变化,RT-PCR检测各组视网膜Bax、Bcl-2的mRNA的表达变化情况。  结果:贴壁法分离培养的BMSCs呈克隆式生长,传代培养3代后细胞可获较高纯度,成骨及成脂肪诱导阳性。流式细胞仪检测结果显示,体外培养BMSCs表达CD90及CD44,不表CD34。电镜观察结果显示单纯光照组在强光暴露24h后开始出现视网膜超微结构出现了典型光损伤改变,出现凋亡的迹象。视网膜HE染色显示单纯光照组暴露在强光下24h就开始出现外核层厚度变薄,至14d外核层细胞大量消失,外核层细胞数明显减少;Evans蓝灌注显示单纯光照组在光照后24h出现染料渗漏,并逐渐下降,于14d又出现明显渗漏,移植组染料渗漏情况明显改善。PCR显示BMSCs移植后治疗组可检测到SRY基因的表达,Bax在单纯光照组高表达,14d表达量减少,Bcl-2在单纯光照组弱表达,移植组Bax表达逐渐下调、Bcl-2逐渐上调。  结论:BMSCs早期静脉移植能影响Bax/Bcl-2表达促进损伤视网膜的修复,并改善血-视网膜内屏障功能。
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