论文部分内容阅读
目的：1、建立轮状病毒(Rotavirus，RV)肠道内、外感染的乳鼠模型，检测外周血Th1细胞因子(IFN-γ）和Th2细胞因子（IL-10）的水平，比较Th1/Th2细胞因子在RV肠道内外感染中变化的差异性，探讨Th1/Th2细胞因子免疫自稳失衡是否参与RV肠道外感染的发病，为临床防治重症RV感染提供新的思路。2、观察乳鼠感染RV后的临床表现及不同时间点组织病理改变，探讨肠道外不同组织病理损伤特点。 方法：以恒河猴胚肾细胞（MA-104）培养猴 RV SA-11，扩增，组织细胞半数感染量（TCID50）法滴定病毒滴度，分装，-80℃保存备用。实验动物选用10~11日龄的清洁级ICR乳鼠，将48只乳鼠随机分为3组，每组16只，即肠道外组：乳鼠经腹腔注射150μl SA11株RV培养液；肠道内组：乳鼠灌胃150μl SA11株RV培养液；正常对照组：不做任何特殊处理。接种病毒后，各组乳鼠隔离饲养。接种当天以第0天计，接种后每天观察乳鼠的活动状况、饮食情况、体型、毛色光泽、体型、大便变化等，并收集大便经胶体金法检测其中RV抗原。分别在接种后的第3天、第8天处死乳鼠，收集外周血，离心留取血清，经ELISA检测细胞因子IFN-γ和IL-10水平，留取肝、肺、心、脾、肾、脑、小肠组织，苏木精－伊红（HE）染色光镜下观察形态学改变。 结果：1、RV SA-11株在MA-104细胞内增殖良好，感染后12h即可出现病变，表现为拉网、细胞圆缩、脱落，24h病变可达到(+++～++++)，组织细胞半数感染量法滴定所收集的病毒液，滴度TCID50为10-4。2、肠道外组乳鼠腹泻不明显，但是肠外感染症状重，表现为食欲不振，活动减少，体毛蓬松、无光泽，嗜睡、对刺激反应差、大便量少等，第3~4天达到顶峰，至第8天精神状况好转，但食欲欠佳，皮毛无光泽。肠道内组所有乳鼠均出现腹泻，第2~3天达到顶峰，至第8天症状完全消失。3、肠道内组IFN-γ水平在接种RV后第3天明显升高，与正常对照组比较P<0.01，随后明显下降，至第8天达到基线水平；IL-10水平在第3天、第8天无明显改变。肠道外组IFN-γ水平在第3天亦升高，与正常对照组比较P<0.05，与肠道内组比较无差异，第8天下降至正常范围；IL-10水平在第3天明显升高，与正常对照组和肠道内组比较P<0.05，第8天水平下降，但是仍然高于正常值。4、RV肠道外感染病程长，多脏器受累，病理改变较重。感染后第3天肠道外组乳鼠的肝脏、肾脏、肺脏、小肠表现不同程度的细胞水肿、充血、坏死脱落等，脾脏白髓扩大，生发中心增多，第8天部分脏器淋巴细胞浸润明显，呈现加重或趋向慢性感染的特点，心肌早期轻度浊肿，大脑未见明显改变。 结论：1、ICR乳鼠肠道内、外感染RV模型建立成功。乳鼠肠道内感染RV尤其是早期以IFN-γ表达为主，Th1反应为主；肠道外感染早期呈现Th1-Th2混合反应，而后期以Th2应答占优势，Th1/Th2类细胞因子平衡机制失衡，该机制可能是RV肠道外播散的重要原因。2、RV可以引起肠道外肝、肺、肾、脾等多器官病变，部分组织器官损伤逐渐加重或呈现慢性感染的趋势。