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CP7菌株属多粘类芽孢杆菌,经导师课题组的研究表明,在该菌的发酵产物中,已分离出3种性质不同的抗菌蛋白,互相之间没有交叉拮抗作用。其中新发现的抗菌肽Cpacin和多粘菌素E分别抗G+、G—,其活性高、性质稳定,显示了良好的开发利用前景。本文在原有研究的基础上,对CP7菌的发酵培养基配方进行了优化,探讨了Cpacin的杀菌机理和生物安全性,以期为开发应用提供理论依据。
1.优化了CP7菌发酵培养基,确立了以国产可溶性淀粉代替进口可溶性淀粉的低成本培养基配方。
2.建立了用考马斯亮蓝G—250染色法和琼脂平板扩散法的组合方法,可简易定量测定抗菌肽Cpacin的含量。
3.Cpacin对金黄色葡萄球菌有较强的杀菌能力,用最小抑制浓度(MIc,0.065mg/L)就起到抑制菌体分裂,延缓生长的作用。
4.Cpacin作用于金黄色葡萄球菌之后,会引起细胞内磷的大量泄漏,而且该作用是在短时间内发生并且是急剧的。通过电导率法测得,Cpacin改变了金黄色葡萄球菌细胞膜的渗透性。推测胞内物质的外泄是由于离子通道与细胞膜的渗透性改变而引起的。
5.用电子显微镜作进行组织学的观察,扫描电镜观察的结果表明,经Cpacin处理后的金黄色葡萄球菌,细胞表面粗糙,可以看到外泄物,但细胞表面的破损不明显;透射电镜观察,见到胞内物质凝集,部分膜区破损,细胞内容物泄出,细胞内成空泡状,但细胞壁基本保持完整。多粘菌素E作用于大肠杆菌,扫描电镜观察可以明显地看到细胞表面严重缺损、坍塌,大量内容物泄出;透射电镜可以看到胞内物质泄出,细胞壁和细胞膜大范围被破坏而缺损,胞内物质高度凝聚或大量逸出。表明CP7菌产生的抗菌蛋白都会通过破坏细胞组织、引起内容物外泄而导致细胞死亡。
6.对CP7菌发酵液作了动物安全性的初步试验。发酵液对小鼠的饲料利用率和体重增长等各项生理指标均有比对照组好的倾向;急性毒性试验表明CP7菌发酵液为无毒物质;对小鼠的肝、肾、脾脏等代谢活跃器官和免疫器官的细胞未见不良影响。结果显示对动物是安全的。