【摘 要】
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甲型流感病毒M2蛋白是一种具有高保守性，可形成离子通道并影响流感病毒血凝素(hemagglutinin，HA)天然构象的形成，有利于病毒脱壳，具有型特异性，被认为是具有交叉免疫保护性的结构
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甲型流感病毒M2蛋白是一种具有高保守性，可形成离子通道并影响流感病毒血凝素(hemagglutinin，HA)天然构象的形成，有利于病毒脱壳，具有型特异性，被认为是具有交叉免疫保护性的结构蛋白。DNA疫苗能够同时刺激机体B细胞，辅助性T细胞(helper T cell，Th)和细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocytes，CTL)，产生特异性体液免疫和细胞免疫，易于操作，经济有效，目前已成为疫苗研究的热点。美国国立卫生研究院(National Institutes of Health，NIH)和世界卫生组织(World Health Organization，WHO)都强调流感DNA疫苗是流感疫苗研究的一个重要方向。 目的 本研究的目的在于通过构建甲型流感病毒M2蛋白的真核表达载体，用M2蛋白的真核表达载体核酸免疫实验动物后再用流感病毒攻击，观察重组质粒pcDNA3.1(+)／M2的免疫保护作用，为进一步研究M2蛋白的交叉保护作用奠定基础。 方法 我们首先将人流感病毒A／PR／8／34(H1N1)经鸡胚尿囊液接种培养，用红细胞吸附释放法(absorption and release-RBC，AR-RBC)纯化病毒。在甲型流感病毒M2基因的克隆方面，先提取人流感病毒株A／PR／8／34(H1N1)的RNA，用特异引物进行RT-PCR扩增获得M2基因。将扩增的M2基因片段克隆入真核表达质粒载体pcDNA3.1(+)，转化感受态E．coli JM109并筛选阳性克隆。双酶切、多聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)鉴定重组质粒
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