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本文旨在将纳米粒子修饰到电极上建立性能优良的电化学免疫/生物传感器,用于微囊藻毒素-(亮氨酸-精氨酸)(MC-LR)以及苯酚等酚类的快速检测。 (1)通过交联剂戊二醛将微囊藻毒素单克隆抗体(anti-MC-LR)和Fe3O4磁性纳米粒子连接制备生物磁性纳米粒子anti-MC-LR/Fe3O4,利用自制磁性玻碳电极内的NdFeB强力磁铁将其修饰在电极表面,构建了一种检测微囊藻毒素的免疫传感器。该传感器基于直接竞争的免疫分析模式,辣根过氧化物酶偶联的微囊藻毒素(MC-LR-HRP)和待测物竞争结合固定在电极表面的抗体。 在抗原-抗体反应完成之后,差分脉冲伏安(DPV)峰电流ip随着MC-LR浓度增加而减小,当背景电流达到稳定时,阳极峰电流记作ip0,峰电流差值由公式△ip=ip0-ip计算。在优化的实验条件下,差分脉冲峰电流的差值△ip与MC-LR浓度的对数在区间0.0100~100μg/L成良好的线性关系,检出限为0.009μg/L;利用安培法考察该免疫传感器,安培响应电流与MC-LR浓度在0.100-100μg/L的范围内呈线性关系,检出限为0.08μg/L。对实际水样中的MC-LR进行了测定,并且进行了加标回收实验。 (2)微囊藻毒素单克隆抗体anti-MC-LR自组装到电沉积了纳米金的玻碳电极表面,构建了电化学发光(ECL)免疫传感器。 MC-LR和MC-LR-Ru@SiO2竞争结合固定的抗体,反应完成后将在含有100 mmol/L三丙胺(TPA)的磷酸缓冲溶液中测量ECL信号,ECL信号随着MC-LR浓度的增加而减小。在优化的条件下, ECL信号在0.100-100μg/L MC-LR浓度范围内与MC-LR浓度的对数呈的线性关系,检测限为0.007μg/L,并对实际水样进行了测定以及加标回收实验。 (3)将Fe3O4@Au磁性纳米粒子固定到自制磁性玻碳电极表面,然后将丝素蛋白(SF)修饰到电极上,以戊二醛为交联剂固定酪氨酸酶,构建电流型酚类生物传感器,研究其对酶促反应产物的电催化性能。苯酚在酪氨酸酶的催化下被溶液中的溶解氧氧化成邻苯醌,醌类物质在电极表面迅速还原成邻苯二酚,从而产生还原信号。该传感器测定苯酚的线性响应范围为2.0×10-8~1.00×10-5 mol/L,检出限为2.0×10-8 mol/L。