论文部分内容阅读
目的：本试验对其在鼠受精卵一细胞期中的活性进行检测。因为plk蛋白含量对其活性有影响，所以从蛋白水平对其表达情况进行检测。为了确定在小鼠受精卵分裂过程中是否plk1参与了MPF活化的正反馈环，同时也检测了小鼠受精卵第一次有丝分裂各期plk1的活性及加入MPF抑制剂后plk1及MPF的活性变化。
方法：1.取5～6周龄成熟雌性昆明系小白鼠孕鼠的输卵管，放入37℃预热的M2培养液中。撕开壶腹膨大处，使卵流出。用300μg/ml透明质酸酶消化去除颗粒细胞，然后移入M16培养液。在指定时间收集受精卵。2.收集的受精卵(100个/组)加入样品缓冲液，加热到100℃，5分钟。10﹪SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分裂蛋白。转印到硝酸纤维素膜上，与第一抗体4℃孵育过夜，经TBS洗涤后，再与第二抗体室温孵育2小时，TTBS充分冲洗后显色观察。3.收集的受精卵(30个/组)加入20μl的裂解缓冲液冻融3次使细胞裂解。
结论：1.在小鼠受精卵第一次有丝分裂过程中plk1的含量没有变化。2.plk1的活性是随着细胞周期的进程而变化的，在M期达到最高峰。在M期结束时迅速下降。3.加入roscovitine后MPF的活性受到抑制，从而导致受精卵的分裂受到抑制。MPF抑制剂不仅影响了MPF的活性还抑制了plk1的活性，plk1在早期小鼠受精卵分裂过程中可能参了MPF的自我催化活化环。