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定时输精技术对提高母猪配种利用率、减少非生产天数、组织批次化生产具有重要意义。为探究定时输精程序处理对母猪繁殖性能的影响机制,本研究选取健康后备母猪12头,分为试验组（T）和对照组（C）,试验组采用烯丙孕素+PMSG+GnRH处理,对照组不采用任何激素处理,于妊娠第16 d和25 d对母猪进行屠宰,采集子宫内膜组织作为研究对象,分别记为T16组（3头）、C16组（3头）、T25组（3头）、C25组（3头）。首先观察子宫内膜组织形态学变化,随后对附植位点子宫内膜进行高通量测序获得miRNA表达谱,比较组织发育和miRNA表达的差异来探究定时输精影响后备母猪繁殖性能的机制。主要结果如下:定时输精程序处理对子宫内膜厚度、微血管和腺体的发育均有一定影响,与对照组相比,无论是妊娠第16d还是妊娠第25 d,试验组后备母猪子宫内膜厚度增加,血管更加致密丰富,腺体发育更发达,在固有层中分布更均匀,这些变化更有利于早期胚胎的附植。通过对妊娠后备母猪子宫内膜组织进行高通量测序,建立了子宫内膜miRNA的表达谱,对测序结果分析筛选出以下与繁殖相关的差异miRNA:ssc-miR-142、ssc-miR-141、ssc-miR-10383、ssc-miR-424,其中 ssc-miR-10383、ssc-miR-424 表达水平上调,ssc-miR-142、ssc-miR-141表达水平下调,并通过qRT-PCR试验对miRNA进行了初步鉴定。使用GO和KEGG富集分析对差异表达miRNA的靶基因进行分析,发现这些差异表达的miRNA通过靶基因参与免疫、细胞功能相关通路实现对胚胎附植的调节。根据NCBI数据库筛选出miR-424的靶基因COP1与CX3CL1,证实其在后备母猪子宫中存在差异表达:试验组后备母猪子宫内膜COP1和CX3CL1表达水平均显著低于对照组（P<0.05）,表明ssc-miR-424在妊娠早期母猪子宫中可靶向作用于COP1、CX3CL1两个基因的表达参与调节早期妊娠时胚胎的附植。综上,本试验表明定时输精程序处理促进了妊娠早期后备母猪子宫的发育,有利于早期胚胎的附植;筛选出了试验组和对照组子宫内膜差异表达的miRNAs,证实定时输精程序处理可上调子宫内膜ssc-miR-424表达,进而下调靶基因CX3CL1的表达参与胚胎附植的调控。