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兰属(Cymbidium)是兰科中重要的一个属,兰属植物是珍贵的观赏植物,具有极高的经济价值、文化价值和广阔的市场前景。研究兰花新品系的快速繁殖和创建多倍体资源对推动兰花育种和产业发展具有极其重要的意义。本研究以课题组育成的兰花新品系“中国小姐”和“中国先生”为材料,进行类原球茎增殖和分化控制等实验,以建立适合工厂化繁殖的高效快繁技术体系。同时以类原球茎为材料进行多倍体诱导和鉴定,获得多倍体植株。主要研究结果如下:
1.培养时间、活性炭和切割处理对类原球茎增殖和分化影响显著。随着培养时间的增长,“中国小姐”类原球茎的绝对生长速度逐渐增加。培养20d时,原球茎出现分化,原球茎的绝对生长速度和分化率分别为83.17%和4.00个,瓶。培养至40d时,增殖率和分化率分别为308.29%和8.67个/瓶。类原球茎在添加活性炭的培养基中的增殖率显著高于未添加活性炭的培养基,而分化率显著低于未加活性碳的培养基。切割处理对类原球茎的繁殖和分化有明显影响。单个类原球茎最易分化,分化率高达61.54%;1/4类原球茎褐化率最高,为38.64%。
2.最适宜“中国小姐”类原球茎的一步成苗培养基为MS+6-BA l.5 mg·L+NAA0.2 mg-Ll+活性炭0.3 g-L%蔗糖30 g·Ll+琼脂粉5.5 g·Ll。在该培养基上,类原球茎的绝对生长速度为274.21%,平均苗分化数为4株/瓶。最适于“中国先生”类原球茎一步成苗培养基为MS+6-BA l.5 mgLq+NAA0.1 mg.Ll+活性炭0.3 g-L-1+蔗糖30 gLl+琼脂粉5.5g-Lq。在该培养基上,类原球茎绝对生长速度为255.50%,平均苗分化数为3株/瓶。
3.最适合“中国小姐”分步成苗的类原球茎增殖培养基为MS+6-BA l.0 mgLq+NAA0.2 mgL%活性炭0.3 g.Ll+蔗糖30 gL%琼脂粉5.5 g.L"l,分化培养基为1/2 MS+6-BA l.5 mg·L"1+NAA0.1 mg-L"l+蔗糖20 gL+琼脂粉5.5gL,生根壮苗培养基为1/2 MS+NAA0.5 mgL土豆汁100 gLl+活性炭0.5 gL+蔗糖20g.L+琼脂粉5.5gL。在上述培养基上,类原球茎增殖率、芽分化数和平均根数分别为405.16%、46.22个/瓶和2.80条,采用分步成苗的快繁效率是一步成苗法的2倍。
4、最适合“中国先生”的类原球茎增殖培养基配方为MS+6-Bal.5 mg.LNAA0.2 mgLq+活性炭0.39.L.1+蔗糖30gL+琼脂粉5.5g.L。最适合分化的培养基为1/2 MS+6-BA2.0mgL+NAA0.1mgL+蔗糖20 gL+琼脂粉5.5 gL,在上述培养基上,类原球茎增殖率和芽分化数分别为363.82%和46.00个/瓶。
5.秋水仙素处理明显抑制类原球茎的增殖和分化,显著提高类原球茎褐化率。秋水仙素处理能诱导类原球茎染色体加倍,在9个处理中,7个处理的再生植株中鉴定出多倍体。其中处理浓度为0.05%,处理时间为5d时,多倍体诱导率最高,为11.1%,未经秋水仙素处理类原球茎的再生植株没有鉴定出多倍体。多倍体植株与二倍体植株相比,茎部粗壮,株型紧凑,叶片变厚,颜色深绿。不同品种的多倍体诱导率不同。
通过上述研究,有效控制了类原球茎的增殖和分化,建立了适合兰花新品系的快速繁殖技术体系和“中国小姐”的多倍体诱导和鉴定技术体系,获得了一批多倍体资源,为进一步开展兰花育种、快繁和理论研究奠定了基础。