论文部分内容阅读
地西他滨(decitabine，DAC)是2-脱氧胞苷类似物，是一种具有特异性的DNA甲基转移酶抑制剂。研究表明，低剂量地西他滨的药物效应主要表现为DNA去甲基化作用，激活某些沉默基因的表达。而宫颈癌的发生发展同许多肿瘤一样，与多个基因启动子区被异常甲基化所导致的基因沉默有关。因此DNA甲基化在调控免疫相关基因癌/睾丸抗原（cancer/testis antigen，CTA）的基因表达中起着重要作用，而CTA的表达对提高肿瘤细胞的免疫原性有很大意义，可以增强机体对肿瘤细胞的识别杀伤能力，为宫颈癌的特异性免疫治疗提供可能。本研究主要是研究探讨低剂量地西他滨增强T细胞对宫颈癌HeLa、SiHa细胞杀伤活性的作用机制，为地西他滨用于宫颈癌的临床免疫治疗提供实验依据。本研究共分三个部分。 一、低剂量地西他滨对HeLa、SiHa细胞增殖、凋亡、周期的改变 目的:研究低剂量地西他滨对宫颈癌HeLa、SiHa细胞的增殖活性、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法:通过CCK-8法检测不同低浓度地西他滨(10nmol/L和100 nmol/L)对HeLa、SiHa细胞增殖的影响，流式细胞仪检测不同低剂量地西他滨处理72h后HeLa、SiHa细胞凋亡及周期的变化情况;结果:10 nmol/L地西他滨对宫颈癌HeLa、SiHa细胞增殖、凋亡及周期没有显著影响，100 nmol/L地西他滨一定程度上抑制HeLa、SiHa细胞增殖。结论:10nmol/L地西他滨对HeLa、SiHa细胞的生长增殖抑制作用微弱。 二、T细胞对低剂量地西他滨处理后HeLa、 SiHa细胞的杀伤活性 目的:研究T细胞对10 nmol/L地西他滨处理72h后宫颈癌细胞的杀伤活性;方法: T细胞与宫颈癌细胞共培养24 h后，CCK-8法检测T细胞对10nmol/L地西他滨处理后宫颈癌HeLa、SiHa细胞的杀伤作用;结果:低剂量地西他滨增强T细胞对HeLa、SiHa细胞的杀伤，并且在T细胞与处理后宫颈癌细胞效靶比为10∶1时更显著;结论:低剂量地西他滨增强T细胞对HeLa、SiHa细胞的杀伤活性。 三、低剂量地西他滨处理后HeLa、SiHa细胞相关癌/睾丸抗原及FasL的mRNA表达的变化 目的:探讨10 nmol/L地西他滨增强T细胞杀伤细胞的机制，为宫颈癌的临床免疫治疗提供依据。方法:实时定量PCR检测HeLa及SiHa细胞相关CTA及FasL的mRNA的表达;结果:低剂量地西他滨上调了宫颈癌细胞中BORIS、NY-ESO-1、MAGE-A1/A3/A4及FasL的mRNA的表达水平;结论:低剂量地西他滨处理后激活了免疫相关的癌/睾丸抗原的表达，增加肿瘤细胞的免疫原性，从而使T细胞通过FasL等相关通路促进宫颈癌细胞的凋亡。