论文部分内容阅读
鼻咽癌发病在世界范围内具有明显的地域性，高发于中国南部及东南亚地区，尤其是广州附近的广府人群密集区。鼻咽癌本身对放疗非常敏感，但是绝大多数病人就诊时已处于晚期阶段，常伴随淋巴结转移。造成这种现象的主要原因是由于缺乏有效的鼻咽癌早诊手段。研究已确证EBV感染与鼻咽癌的发生密切相关，临床上常用检测EBV IgA或IgG抗体的方法来辅助鼻咽癌诊断。但是不同个体的EBV抗体谱相差很大，因此联合多个EBV血清抗体指标对于鼻咽癌的诊断更加有效。而目前的检测方法如ELISA每次只能检测一两个指标。最近Luminex公司在微球流式分析的基础上开发了液相悬浮多功能分析技术（xMAP），这种技术每次可以同时检测100个以上的不同反应，不同的反应微球可以由Luminex100或200设备进行识别分析。
通过xMAP技术，我们筛选了28种EBV抗体在大约100个鼻咽癌病人及健康对照中的分布情况。我们确证了几种已知EBV抗体指标对鼻咽癌的诊断价值，如IgA—VCA，IgA—EA，IgA—EBNAI，IgA—p18和IgG—EA，IgG—EBNAI。此外，我们发现了鼻咽癌诊断的一个新指标：gp78抗体。我们的结果显示IgA—gp78对鼻咽癌诊断的敏感性和特异性分别为79%和71%，而IgG—gp78的敏感性和特异性分别为74%和73%。同一个体中EBV IgA和IgG的反应并不相同，因此gp78抗体可以与VCA、EA—D、EBNAI抗体互补。如果这几种抗体联合起来，其对鼻咽癌诊断的敏感性和特异性分别达到91%和95%。因此多种EBV血清学指标联合检测可以有效提高其对鼻咽癌的预测值。
此外，我们比较了xMAP技术与商业ELISA试剂盒在EBV血清学检测中的效用。分别检测了135例鼻咽癌病人和130例健康对照血清样本中的4个EBV抗体指标：IgA—VCA，IgA—EBNAI，IgA—EA—D和IgG—EA—D。xMAP分析中这4个指标的敏感度和特异度在71.5%—90%之间，而ELISA分析中其敏感度和特异度在80%—92%之间。Logistic回归分析显示xMAP测定的四个指标联合起来其敏感度和特异度分别为82%和92%。对于两种方法的相关性来说，IgA—VCA最差（r=0.468），IgA—EBNAI最好（r=0.846），而IgA—EA—D和IgG—EA—D的r值分别为0.719、0.798。这两种方法对于鼻咽癌鉴别的一致性较好（79%—88%）。当多个抗原同时分析时，两种方法对EBV抗体检测均可达到满意程度。
最后，我们检测了不同人群中的多种EBV抗体分布。首先检测了546例广东鼻咽癌病人和542例广东健康对照中的8个EBV指标，用以确定每个指标的诊断标准及评价联合诊断价值；然后检测了30例鼻咽癌病人接受治疗前后的EBV抗体水平动态分布；另外检测的血清包括90个鼻咽癌高发家系成员、52例低发区健康体检者、200例其他实体瘤病人、以及其他EBV相关疾病病人（16例传染性单核细胞增多症、28例NK/T细胞淋巴瘤和14例何杰金氏病）。
在大规模人群筛查中，每个EBV指标对于鼻咽癌诊断的敏感性和特异性介于61%—84%之间，而这8个指标联合起来建立logistic回归诊断模型，其敏感度和特异度分别为84.5%和92.4%。在鼻咽癌治疗监测分析中，半数的鼻咽癌病人在治疗开始后的短时间内表现出了EBV抗体水平的下降，而鼻咽癌转移和复发的病人则表现出持续的EBV抗体高水平。在我们的分析中，高发家系的未患病者及低发区健康人与广东健康人相比，其血清EBV抗体水平均没有显著性差异。而不同的EBV相关疾病病人表现出不同的EBV抗体水平升高谱，例如，传染性单核细胞增多症病人其IgA—gp125升高，NK/T细胞淋巴瘤病人其IgG—EA水平升高，而何杰金氏病病人的IgA—p18升高。有意思的是，与其他EBV相关疾病病人相比，鼻咽癌病人的多种抗体水平均显著高很多，说明EBV在鼻咽癌中保持着较高的活性。
总之，利用xMAP技术，我们初步研制出了检测血清EBV抗体的液相芯片试剂盒，并在大规模人群中进行了验证，与其它疾病进行了鉴别诊断分析，显示此试剂盒有较好的应用价值。对其生产工艺的改进需要进一步的研制开发。