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目的:孤立低高密度脂蛋白胆固醇表型(Isolated low high-density lipoprotein cholesterol phenotype)是除血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平降低外,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG)的水平均在正常参考范围内的一种血脂异常表型。流行病学调查显示,孤立低HDL-C表型作为亚洲人群中最常见的血脂异常表现之一,与冠心病的相对风险增加有关。孤立低HDL-C表型与心血管疾病在炎性因子,内皮功能紊乱,巨噬细胞胆固醇反向转运等过程中具有较多共性。本研究利用孤立低HDL-C表型,通过microRNA生物信息学检索与芯片数据分析等整合技术,探讨了动脉粥样硬化调节性miR-222-3p、ApoE基因多态性与孤立低HDL-C表型间的关系。旨在为心血管病相关循环mi RNAs候选标志物的筛选、验证以及临床意义的阐明提供一种新的解决方案。方法:1利用生物信息学的检索方法和手段,围绕ERK2所介导的ABCA1信号途径相关的HDL-C调节作用,对miRWalk、mi RBase数据库以及不稳定型心绞痛相关的循环micro RNAs芯片数据进行整合分析,结合mi RNAs功能特点,筛选和确定ERK2、心血管疾病关联的循环miRNAs候选分子。2选取2014年8月1日至2015年11月30日,年龄在20~55岁之间,在唐山市工人医院体检科进行体检,且符合入组标准的174例研究对象。其中孤立低HDL-C表型组(Isolated low HDL-C phenotype,ILHP)88例,正常血脂表型组(Normal lipid phenotype,Control)86例。提取两组血浆总RNAs,利用Taq Man microRNA检测系统检测血浆miR-222-3p表达水平,以miR-191-5p血浆表达水平为内参,进行归一化处理,采用2-?Ct表示相对表达量。3提取174例体检人群外周血白细胞基因组DNA,采用由美国应用生物公司(ABI)开发的SNaPshot技术和3730XL DNA测序平台,检测ApoE基因rs429358和rs7412两位点的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,snp)。4采用r3.0.2软件和graphpadprism5.0软件对试验数据进行统计学分析。计数资料组间比较采用卡方检验,计量资料首先使用d`agostinoandpearsonomnibusnormalitytest方法进行正态性检验,正态性数据以均数±标准差(?x±s)表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用方差性检验;非正态性数据以中位数(四分位数)[m(p25,p75)]表示,两组间样本比较采用wilcoxonranksum检验,多组间比较采用dunnmultiplecomparisontest非参数多重检验。相关分析采用spearman相关分析方法。风险因素分析采用二元或多重logistic回归模型分析。以p<0.05为差异有统计学意义。结果:1经过erk2相关的mirnas预测、不稳定型心绞痛循环mirnas芯片数据分析以及mirnas功能分析,确认定位于xp11.3、血浆水平高表达且与动脉粥样硬化相关的mir-222-3p作为候选标志物;2孤立低hdl-c表型组(88例)循环mir-222-3p的表达水平高于正常血脂表型组(86例)[0.38(0.10,0.70)vs0.16(0.04,0.41)],差异有统计学意义(w=2664,p<0.001);3男性组(90例)、女性组(84例)血浆mir-222-3p的表达水平分别为0.27(0.05,0.51)和0.27(0.07,0.57),组间差异无统计学意义(w=3916,p=0.683);4dunnmultiplecomparisontest非参数多重检验显示,男性孤立低hdl-c表型组(45例)血浆mir-222-3p表达水平显著高于男性正常血脂表型组(45例),组间差异有统计学意义0.35(0.16,0.66)vs0.15(0.03,0.33),p=0.016;女性孤立低hdl-c表型组(43例)血浆mir-222-3p表达水平高于女性正常血脂表型组(41例),组间差异有统计学意义0.41(0.07,0.71)vs0.17(0.07,0.43),p=0.046;5spearman相关分析显示,血浆mir-222-3p表达水平与hdl-c水平呈负相关(r=-0.20,p=0.008)。二元logistic回归模型分析显示,血浆mir-222-3p高表达个体表现出孤立低hdl-c表型的相对风险增加5.45倍(or=5.45,95%ci:1.99–14.88,p<0.001);经年龄、性别、血脂、肝功能、血常规等临床参数和检验指标调整后,其相对风险增加8.42倍(OR=8.42,95%CI:2.53–27.98,P<0.001);6哈迪-温伯格平衡(Hardy-weinberg equilibrium,HWE)检验显示,ApoE基因型频率在孤立低HDL-C表型组和正常血脂表型组中的结果分别为:χ2=5.20,P=0.267;χ2=6.18,P=0.186,说明ApoE等位基因频率符合孟德尔随机遗传定律,具有群体代表性;7ApoE基因型ε2/ε3、ε2/ε4、ε3/ε3、ε3/ε4、ε4/ε4在孤立低HDL-C表型组频数(频率)依次为9(10.23%)、3(3.41%)、65(73.86%)、10(11.36%)、1(1.14%);在正常血脂表型组频数(频率)依次为21(24.42%)、4(4.65%)、54(62.79%)、7(8.14%)、0(0.00%)。ApoE等位基因ε2、ε3、ε4在孤立低HDL-C表型组频数(频率)依次为12(6.82%)、149(84.66%)、15(8.52%);在正常血脂表型组频数(频率)依次为25(14.53%)、136(79.07%)11(6.40%)。Fisherχ2卡方检验显示,ApoE基因型、等位基因组间分布情况差异无统计学意义(χ2=7.43,P=0.081;χ2=5.73,P=0.057);8多元Logistic回归分析显示,ApoE2基因型携带者较ApoE3基因型携带者血清LDL-C水平有所降低(RRR=0.03,95%CI:0.00–0.27,P=0.002);与孤立低HDL-C表型无相关性(RRR=0.40,95%CI:0.09–1.78,P=0.230)。与血浆mi R-222-3p水平无相关性(RRR=1.54,95%CI:0.36–6.68,P=0.562)。结论:1循环miR-222-3p水平能诠释孤立低HDL-C表型的部分分子病理特点,个体血浆miR-222-3p水平升高,孤立低HDL-C表型相对风险增加。2ApoE基因多态性与孤立低HDL-C表型无关,与循环miR-222-3p表达水平无关。3证实了以孤立低HDL-C表型为人类模型,辅助阐明心血管疾病相关循环miRNA临床意义的可行性。