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[目的]依托咪酯是一种超短效静脉麻醉药,用于全身麻醉的诱导和维持。依托咪酯通过结合γ-氨基丁酸A型(GABAA)受体产生镇静作用。电生理学研究表明,依托咪酯可增强GABA诱发的Cl-电流的幅度、增加GABA能抑制性突触传递、增强大鼠脊髓的背根神经细胞中甘氨酸电流,表明依托咪酯可增强GABAA受体和甘氨酸受体的活性。然而,依托咪酯对活体小鼠小脑皮层浦肯野细胞(PC)自发性简单峰电位(SS)放电和颗粒细胞层感觉信息传递的影响尚未完全了解。在这项研究中,我们通过电生理学录和药理学手段探究依托咪酯对小鼠小脑皮层浦肯野细胞自发性简单峰电位放电频率和颗粒细胞层感觉信息传递的影响,旨在阐明依托咪酯抑制活体小鼠小脑浦肯野细胞自发性简单峰电位放电频率及颗粒细胞层感觉信息传递的机制。[方法]实验采用乌拉坦麻醉的成年(6-8周龄)ICR小鼠,在小脑蚓部Ⅵ-Ⅶ区域或Crus 11区钻一个直径为1-1.5 mm的小孔,暴露出小脑表面。在电流钳模式下(Ⅰ=0),使用Axopatch 200B放大器获得的浦肯野细胞附着式记录及颗粒细胞层局部场电位记录,通过Clampex 10.3软件和D/A数模转换器获得电生理数据。将所有化学药品最终溶解形成溶液,等分成样品并保持冷冻。将药物溶解在ACSF中以0.4 ml/min的速度灌流于小脑表面。在涉及KT5720的实验中,在记录前KT5720至少提前灌流30分钟,并在整个实验中保持持续灌流。所有实验数据均表示为平均数±标准误。使用SPSS 21.0软件进行配对T检验或单因素方差分析,以评估在对照和实验条件下记录的平均值之间的差异。P值低于0.05被认为实验组和对照组之间具有统计学意义。[结果]第一部分:(1)在电流钳记录模式下,小鼠小脑皮层肯野细胞表现为规律的自发性简单峰电位放电和不规率的复杂峰电位放电。小脑表面灌流给予依托咪酯可导致浦肯野细胞简单峰电位的放电活动抑制,放电频率降低,其抑制作用有浓度依赖性,半数抑制浓度为43.4 μM。(2)单独给予γ-氨基丁酸A型(GABAA)受体拮抗剂SR95531或甘氨酸受体拮抗剂士的宁,对浦肯野细胞的简单峰电位放电活动没有显著影响,但二者均可显著减弱依托咪酯介导的浦肯野细胞简单峰电位放电频率降低。(3)在GABAA受体拮抗剂SR95531和甘氨酸受体拮抗剂士的宁同时存在条件下,可以完全阻断依托咪酯所导致的浦肯野细胞简单峰电位放电频率地降低。(4)腹腔注射依托咪酯(3 mg/kg体重)同样可以导致浦肯野细胞自发性简单峰电位放电频率显著降低,这种系统给予依托咪酯所导致的浦肯野细胞简单峰电位放电活动抑制可以被小脑表面灌流GABAAA和甘氨酸受体拮抗剂所阻断。第二部分:(1)小脑表面灌流依托咪酯显著抑制吹风刺激同侧触须垫诱发的颗粒细胞层场电位反应,表现为刺激开始反应(N1)振幅降低和曲线下面积(AUC)减小。(2)给予GABAA受体拮抗剂SR95531显著减弱但不能完全消除依托咪酯介导的N1振幅降低和AUC减少。(3)在阻断GABAA受体的条件下,小脑表面给予CB1受体拮抗剂AM-251完全阻断依托咪酯介导的N1振幅降低和AUC减少。(4)在阻断GABAA受体活性的条件下,给予CB1受体激动剂WIN55212-2可引起N1振幅降低和AUC减少,并能阻断依托咪酯对N1的抑制作用。(5)此外,在阻断GABAA受体活性的条件下,给予特异性PKA抑制剂KT5720可完全消除依托咪酯介导的N1振幅降低和AUC减少。[结论](1)依托咪酯通过活化GABAA和甘氨酸受体来抑制小鼠小脑浦肯野细胞自发性简单峰电位放电活动,导致放电频率显著降低。(2)在阻断GABAA受体活性的情况下,依托咪酯通过活化小鼠小脑颗粒细胞层CB1受体,并通过PKA信号通路抑制感觉刺激诱发的苔藓纤维-颗粒细胞的突触传递。